Реферат: Диагностика туберкулезных лимфаденитов методом пункции. Дифференциальная диагностика. Бактериологическая диагностика туберкулеза
Макроскопически материал, получаемый при пункции, имеет далеко не одинаковый характер. Так, пунктаты дермоидных опухолей чаще всего представляют собой грязноватого цвета жидкость, легко поступающую в шприц, реже — кашицеобразную массу, напоминающую субстрат туберкулезных лимфатических узлов в случае их казеозного перерождения. Смешанные и простые железистые опухоли характеризуются наличием обильного кровянистого субстрата.
Первое, что привлекает внимание при исследовании аденом (рис. 54), это — наличие небольших групп одинаковой величины клеток с овальными ядрами, расположенными в общем синцитии, иногда сохраняющих структуру железистой ткани с характерным дольчатым строением (рис. 55). Хроматиновая сеть характеризуется плотной равномерной структурой и отсутствием нуклеол. Протоплазма бледноголубая. В мазках так называемых смешанных доброкачественных опухолей клетки аденоидной ткани располагаются среди тонких волокон соединительной ткани, окрашивающихся эозином е розовый цвет (рис. 56). Пунктаты дермоидных кист состоят из клеток плоского эпителия в различных стадиях ороговевания (рис. 57), кристаллов холестерина, а иногда (вероятно, в случаях начинающегося нагноения кисты) и нейтрофилов.
Помимо указанных выше заболеваний, цитологический метод исследования пунктатов дает возможность также диференцировать процессы, связанные с заболеванием кроветворных органов, воспалительные гиперплазии лимфатических узлов неспецифического характера — сифилис и актиномикоз. В постановке диагноза актиномикоза решающую роль играет исследование нативного препарата из лимфатических узлов, в котором можно обнаружить друзы актиномикоза.
Таким образом, цитологический метод исследования пунктатов позволяет четко диференцировать основные заболевания лимфатических узлов и в ряде случаев является решающим в диагностике патологического прοцесса.
БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ТУБЕРКУЛЕЗА
Для обнаружения возбудителя туберкулеза в патологическом материале в основном пользуются бактериоскопическим и бактериологическим методами. Так как первый наиболее прост и доступен, его преимущественно и используют, несмотря на недостаточную чувствительность.
Бактериологический способ менее доступен и требует гораздо больше времени (от 7 дней до нескольких месяцев), тем не менее он применяется при диагностических исследованиях, поскольку имеет подчас решающее значение в постановке правильного диагноза, например, при диференциации непатогенных кислотоупорных сапрофитов от туберкулезных микобактерий.
К бактериологическому исследованию обычно прибегают в случаях, когда бактериоскопический метод, включая и накопление микробов с помощью флотации, дает отрицательные результаты. Бактериологический способ исследования патологического материала распадается на следующие этапы: а) выделение чистой культуры микобактерий туберкулеза; б) дифференциация ее от кислотоупорных сапрофитов; в) биологический метод исследования (определение вирулентности).
Выделение чистой культуры микобактерий туберкулеза осуществляют посевом исследуемого материала на питательные среды. Следует при этом иметь в виду, что мокрота, кал и т. п., наряду с туберкулезными микобактериями, содержат множество других микробов, способных быстро размножаться и подавлять рост возбудителя туберкулеза. Поэтому туберкулезный материал до бактериологического исследования следует освободить от сопутствующей микрофлоры. Для этого пользуются двумя приемами. С одной стороны, нестерильный патологический материал предварительно (до посева) обрабатывают 3—15% раствором серной кислоты с целью уничтожения посторонних микробов, а с другой — делают посевы на яичные среды (Петраньяни, Любенау-Гона, Левенштейна), содержащие краски, задерживающие рост посторонних микроорганизмов, но не препятствующие размножению туберкулезных микобактерий. Выделенная на яичной среде культура в дальнейшем может сохраняться на других средах. Посевы держат в термостате при 37—38° и наблюдают за появлением роста в течение 2—3 месяцев, отмечая время появления первых признаков роста. Из выросших колоний делают окрашенные мазки и проверяют кислото- и спиртоустойчивость микробов. Атипичные колонии (пигментные, гладкие, быстро растущие, легко образующие суспензию) отвивают на среды для дальнейшего изучения.
При отсутствии роста в течение 8—10 недель берут соскоб с поверхности среды и микроскопией устанавливают наличие или отсутствие микророста. В положительных случаях приготовляют взвесь из соскоба и инъицируют ее морским свинкам для определения вирулентности.
Выделение чистой культуры из того или иного патологического материала имеет свои особенности главным образом в части предварительной обработки с целью подавления жизнедеятельности сопутствующей микрофлоры. В соответствии с этим приводим описание, обработки каждого патологического материала в отдельности.
Мокрота. Наиболее распространенным методом обработки материала на туберкулез является метод Гона. При этом методе мокроту собирают в стерильные баночки в утренние часы или в течение суток. Выбирают из нее гнойные частицы. Последние исследуют в окрашенных по Цилю и Граму мазках. Затем берут около 3 мл мокроты (с гнойными комочками), добавляют 6 мл 6—10% раствора серной кислоты, энергично в течение 10 минут встряхивают до полной гемогенизации, потом центрифугируют в стерильной центрифужной пробирке, жидкость сливают, а осадок сеют на яичные среды. Действие серной кислоты (с момента добавления до момента посева, включая и время центрифугирования) должно длиться 20 минут.
Метод Мазура. В ряд широких пробирок наливают по 3 мл 2—3% раствора серной кислоты. Затем, поместив в пробирки гнойные комочки мокроты, гомогенизируют их, умеренно сильно ударяя нижними частями пробирок об упругие поверхности (ладонь, предплечье, сложенное на столе полотенце) в течение 3 минут. При этом над эмульсией мокроты образуется толстый слой пены, содержащий смесь жизнеспособных туберкулезных микобактерий и убитых посторонних микробов. Часть такой пены сеют на яичную среду.
Обработка гортанного мазка. У детей и лиц, не выделяющих мокроты, микобактерий туберкулеза часто можно обнаружить в слизи из гортани. Последнюю снимают ватным тампоном, накрученным на нарезки слегка изогнутого металлического зонда длиной 20 см и толщиной 1 мм. До употребления зонд с тампоном заворачивают в бумагу и стерилизуют обычным способом. Прежде чем взять мазок, больному предлагают покашлять и под контролем гортанного зеркала тампоном снимают слизь с гортани. Затем тампон, снятый с зонда, помещают в пробирку г 5 мл 6% раствора серной кислоты, сильно в течение 5 минут встряхивают, после чего тампон удаляют стерильным пинцетом, предварительно отжав из него жидкость в пробирку. Содержимое пробирки центрифугируют и осадок сеют на яичные среды.
Промывные воды желудка. Промывные воды желудка рекомендуют исследовать у детей, которые, как правило, не умеют отплевывать мокроту и обычно проглатывают ее, а также у взрослых, не выделяющих мокроту или выделяющих ее в незначительном количестве. В подобных случаях промывание желудка и бактериологическое исследование осадка из этих вод оказывается наиболее чувствительным методом обнаружения возбудителя туберкулеза.
Промывные воды получают с помощью желудочного зонда у больных, которым утром натощак дают выпить стакан кипяченой воды. Вытекающую через зонд жидкость собирают в стерильную посуду. Эти воды нейтрализуют 20% раствором двууглекислой соды до нейтральной по лакмусу реакции, отстаивают 1—2 часа (или центрифугируют) и исследуют гнойные частицы осадка так же, как мокроту.
Обработку и посев промывных вод не следует откладывать, так как через 6 часов после взятия материала жизнеспособность туберкулезных бактерий под влиянием желудочного сока заметно ослабевает.
Кал. Кал растирают в стерильной ступке с дестиллированной водой (5 г кала -f- 10 мл воды) и оставляют в покое на 30 минут. За это время крупные частицы оседают на дно. Образовавшуюся на поверхности пленку снимают стерильной ложкой, которую смывают в пробирку 10 мл 4% раствора едкого натра и выдерживают 3 часа в термостате при периодическом встряхивании. После этого взвесь центрифугируют, осадок нейтрализуют по лакмусу несколькими каплями 8—10% раствора соляной кислоты и сеют на яичные среды.
Моча. При исследовании мочи следует помнить, что микобактерий туберкулеза в ней бывает мало. Обычно берут утреннюю мочу, а иногда и суточную. Для концентрации микробов в небольшом объеме пользуются центрифугированием со скоростью 3 000—6 000 об/мин всей порции мочи. Осадок сливают в одну пробирку и исследуют бактериоскопически. При отсутствии посторонних микробов сеют без предварительной обработки серной кислотой.
В противном случае добавляют к осадку двойной объем 6% раствора серной кислоты, перемешивают, центрифугируют и сеют полученный осадок на яичные среды (обработка кислотой, включая процедуру центрифугирования, продолжается 20 минут).
Гной, экссудат, спинномозговую жидкость центрифугируют и осадок, не содержащий посторонних микробов, сеют на среды. Если материал не стерилен, осадок обрабатывают так же, как мокроту.
Обработка кусочков органов. Кусочки органов или желез измельчают в стерильной ступке сначала ножницами, а потом пестиком до кашицеобразной консистенции, добавляют 5 мл 6—10% раствора серной кислоты. Продолжая действовать пестиком, превращают всю массу в суспензию. Последнюю центрифугируют и сеют на яичные среды. Процесс обработки кислотой, включая процедуру центрифугирования, должен длиться 20 минут.
Обработка крови. К 5 мл стерильно взятой крови добавляют 3 мл 10% раствора лимоннокислого натрия, тщательно перемешивают встряхиванием и оставляют на 2—3 часа для получения осадка (или центрифугируют). Плазму отсасывают стерильной пипеткой, осадок переносят в колбу с 40—50 мл дестиллированной воды, осторожно перемешивают круговыми движениями колбы, затем переливают в центрифужные пробирки, центрифугируют 5—10 минут при 3 000 об/мин. Осадок при центрифугировании промывают дестиллированной водой, смешивают его с 1 мл 5% раствора серной кислоты, встряхивают в течение 3 минут, добавляют 5 мл стерильной дестиллированной воды и снова центрифугируют. После этого осадок взмучивают в 1 мл физиологического раствора и стерильной пипеткой сеют на питательную среду.
Молоко. Для бактериологического исследования берут свежее молоко в количестве 30 мл. Его центрифугируют в течение 15—20 минут при 3 000 об/мин. Осадок сеют на питательную среду после предварительной обработки серной кислотой.
Использованная литература:
1. Внутренние болезни / Под. ред. проф. Г. И. Бурчинского. ― 4-е изд., перераб. и доп. ― К.: Вищашк. Головное изд-во, 2000. ― 656 с.