Реферат: Спермограмма как метод лабораторной диагностики
Внешний вид описывается по нескольким параметрам:
· цвет,
· прозрачность,
· запах,
· консистенция.
Время разжижения является важным пунктом исследования спермограммы. В норме сперма жидкая, однако через некоторый промежуток времени на воздухе она коагулирует и превращается в желеобразную массу. В половых путях женщины она разжижается. В условиях лаборатории данный процесс наступает через 40 – 60 минут при комнатной температуре. При нахождении эякулята в термостате это время уменьшается до 10 – 20 минут. Замедленное время разжижения наблюдается при отсутствии в секрете простаты фибринолизина и фибриногеназы. Если разжижение не наступило, то эякулят обрабатывается трипсином (1 мг на 1 мл эякулята). Следует сказать, что дальнейшее исследование проводится после полного разжижения.
Сперма в норме характеризуется серовато-белым цветом с небольшой молочно-белой опалесценцией. В случаях длительного отсутствия половых контактов или мастурбации сперма может иметь желтоватый цвет. Примесь крови окрашивает эякулят в красный, розовый или бурый цвет. Зеленовато-желтый цвет характерен для примеси гноя. В результате приема некоторых лекарственных препаратов цвет спермы может варьировать.
Количество эякулята в норме составляет от 2 до 6 мл, и в среднем эта цифра равна 3 – 4 мл. Снижение количества эякулята (менее 2-х мл) называется гипоспермией. Малое количество эякулята (менее 1 мл) встречается при атрофических процессах в яичниках или же врожденном отсутствии семенных пузырьков (в сочетании с низким рН менее 6,8 и отсутствием фруктозы). Увеличение объема эякулята свыше 10 мл носит название гиперспермия и встречается при гиперфункции бульбоуретральных желез. Однако чаще всего причина гиперспермии неясна. В большинстве случаев гиперспермия не оказывает негативного влияния на фертильность. Полное отсутствие эякулята называется аспермией и встречается при окклюзиях семявыносящих протоков, ретроградной эякуляции, низком уровне гонадотропинов, хронических воспалительных заболеваниях предстательной железы и семенных пузырьков.
Прозрачность спермы обусловлена концентрацией сперматозоидов. Так, если в эякуляте содержится большое число сперматозоидов, он приобретает мутный, молочно-белый вид. И, наоборот, в бедной сперматозоидами сперме имеется стекловидная прозрачность.
Запах эякулята характерный, напоминает запах цветов каштана. Этот специфичный запах спермы придает секрет предстательной железы. Если имеется воспалительный процесс в придаточных половых железах, то тогда запах может быть гнилостным.
Консистенция эякулята или вязкость определяют после разжижения. Эякулят перемешивают и измеряют стеклянной пипеткой путем замера длины нити, которая образуется при пассивном вытекании эякулята из пипетки в течение 15 секунд. Также это возможно сделать и стеклянной палочкой, которую вначале опускают в емкость со спермой. Далее ее поднимают и измеряют длину нити, которая тянется за кончиком палочки. В норме длина нити не превышает 2 см. Повышенная вязкость может быть вариантом нормы. Однако если имеется повышенная вязкость вместе с увеличением времени разжижения, то это может указывать на различные воспалительные процессы в предстательной железе и семенных пузырьках. Также это возможно при наличии хронических инфекционно-воспалительных процессов, вызванных трихомонадами.
Кислотность эякулята измеряется прибором рН-метром или лакмусовыми индикаторными полосками. Измерение рН проводится сразу после разжижения. В норме этот показатель составляет от 7,2 до 8. Сдвиг в кислую сторону может указывать наличие хронических воспалительных заболеваний придаточных половых желез. В сочетании с азооспермией это встречается при обструктивных процессах семявыносящих путей. Кислая реакция спермы вместе с отсутствием фруктозы свидетельствует о том, что в эякулят не попадает щелочной секрет семенных пузырьков (закупорка протоков обоих семенных пузырьков). Резкий сдвиг в щелочную сторону указывает на наличие уреазообразующей мочевой инфекции и встречается при острых воспалительных заболеваниях.
Микроскопическое исследование эякулята
Микроскопическое исследование эякулята является самым важным звеном спермограммы. При микроскопии оценивается:
· концентрация сперматозоидов,
· их подвижность и
· строение;
· проводится подсчет и изучение иных клеточных элементов эякулята.
Количество и подвижность сперматозоидов изучается на прижизненных нативных препаратах без окраски. Для оценки жизнеспособности используются нативные препараты с прижизненной окраской. Морфология изучается после фиксации препарата и специального окрашивания. Исследование выполняется с помощью светового или фазово-контрастного микроскопа с рабочим увеличением (объектив 40х, окуляр10х). Конденсор опущен.
Эякулят сразу же помещается в термостат при +370 C. Микроскопия выполняется после полного разжижения, не позже чем через 60 минут. Концентрация сперматозоидов и их подвижность определяется при помощи счетной камеры Горяева. Счетная камера изготавливается из плотного предметного стекла. На ее поверхности имеется 225 квадратов (15 рядов по 15 квадратов). Эти квадраты называются «большими». Кроме того, на поверхности камеры имеется «малые квадраты», которые имеют размеры 0,05 мм. Между стенкой камеры (там, где нанесена сетка) и боковыми частями имеется зазор в 0,1 мм. После нанесения материала камера прикрывается и притирается покровным стеклом, что фиксирует определенный объем исследуемого материала. Камера Горяева и покровные стекла должны быть вымыты и обезжирены смесью Никифорова, подогреты до +250 C. Кроме того, рекомендуется наносить часть материала и на обычные предметные стекла, обработанные таким же образом. Дело в том, что опытный врач-лаборант при осмотре нативного препарата спермы на обычном предметном стекле может с большой долей достоверности определить основные показатели спермограммы.
После полного разжижения эякулят разводят физиологическим раствором также комнатной температуры в соотношении 5:1. Иногда разведение увеличивают, особенно если имеется молочно-белый цвет эякулята. Полученный материал несколько раз осторожно набирают и опорожняют в пипетку. Далее каплю эякулята подводят под покровное стекло. Материал должен равномерно распределиться по всей камере. После чего необходима стабилизация препарата. Для этого в течение 1 – 2 минут его оставляют на предметном столе микроскопа. Рекомендуется использовать предметный столик микроскопа с подогревом до +370 C. В случае, если этого нет, возможно переместить приготовленную и заправленную эякулятом камеру в термостат на 15 минут при той же температуре. После этого переходят непосредственно к микроскопии.
Исследование не вызывает сложностей, если в большом квадрате камеры Горяева расположено не менее 30 – 40 сперматозоидов. Если это число более 150 – 200, то рекомендуется увеличить разведение в 2, а иногда и в 3 раза.
Если же наоборот клеточных элементов слишком мало, то тогда выполняется центрифугирование эякулята. Излишки жидкости удаляют пипеткой. Следует заметить, что возможно некоторое изменение морфологии в худшую сторону при проведении центрифугирования.
Для оценки достоверности полученного результата исследуют второй препарат. Подсчет ведется, исследуя около 200 – 300 клеток. При подсчете 50 клеток результат считается статистически недостоверным, если разница между двумя исследованиями составляет менее 5 клеток. При подсчете 100 клеток это значение равно 7. И при подсчете 250 клеток – 9.
Во время проведения микроскопического спермиологического обследования определяются следующие параметры:
1. Определение количества сперматозоидов.
2. Оценка подвижности сперматозоидов.
3. Оценка жизнеспособности сперматозоидов.
4. Оценка морфологии сперматозоидов.
5. Исследование «круглых» клеток.