Реферат: Стафилококки. Выявление резистентности к метициллину и другим b-лактамным антибиотикам методом скрининга

S.aureus ATCC 38591 – резистентный;

S.aureus ATCC 29213 – чувствительный.

ПОСТАНОВКА ТЕСТА

Приготовление инокулюма. Бактериальную взвесь стафилококка готовят из нескольких колоний с одинаковой морфологией на стерильном физиологическом растворе (3 мл) и доводят до мутности 0,5 по Мак-Фарланду (1,5·108 КОЕ/мл).

Инокуляция. Метод I (микропипеткой):

1. приготовить разведение 1:100 стандартного инокулюма 0,5 по Мак-Фарланду для получения бактериальной взвеси, содержащей 1,5·106 КОЕ/мл (например, добавить 0,1 мл стандартной суспензии к 9,9 мл стерильного физиологического раствора);
2. с помощью микропипетки нанести каплю (10 мкл) разведенной стандартной суспензии на поверхность агара с оксацил лином.

Метод II (с помощью тампона ):

1. погрузить стерильный ватный тампон в пробирку со стандартизированной суспензией (0,5 по Мак-Фарланду), затем отжать избыток влаги о стенку пробирки;
2. коснуться тампоном поверхности агара с оксациллином.

ИНКУБАЦИЯ. Штаммы S.aureus инкубируются при температуре 35oС в течение полных 24 ч, а коагулаза(–) стафилококков – в течение 48 ч.

Примечание. Среда АГВ не может быть рекомендована для постановки теста в связи с высокой частотой ложноположительных результатов.

УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТА

Интерпретация:

- появление видимого роста более 1 колонии на месте нанесения культуры означает устойчивость данного штамма к оксациллину (метициллину);

- при отсутствии роста на месте нанесения культуры исследуемый штамм учитывается как чувствительный к метициллину (оксациллину).

- при сомнительных результатах, а также для штаммов, выделенных у больных с клинически неэффективной терапией и у больных с серьезными инфекциями, необходимо провести развернутое исследование с определением МПК к оксациллину и гена mecA.

Представление результата:

- S.aureus или коагулаза(–) стафилококк (S.epidermidis), чувствительный к метициллину (оксациллину);

- S.aureus или коагулаза(–) стафилококк (S.epidermidis), резистентный к метициллину (MRSA или MRSE).

Метициллино (оксациллино) резистентные стафилококки должны расцениваться как резистентные ко всем b-лактамам – пенициллинам, цефалоспоринам, карбапенемам, комбинациям пенициллинов с ингибиторами b-лактамаз. Кроме того, среди метициллинорезистентных стафилококков очень часто наблюдается ассоциированная резистентность к другим антибиотикам – аминогликозидам, макролидам, хинолонам, тетрациклинам.

ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДА

1. Скрининг на агаре с оксациллином предназначен для фенотипического определения штаммов, имеющих ген mecA. Однако штаммы с другими типами резистентности иногда могут давать ложноположительный результат.
2. Метод скрининга для выявления резистентности к оксациллину (метициллину) менее надежен у коагулаза(–) стафилококков, чем у S.aureus.

Примечание. Оксациллин в сравнении с метициллином менее стабилен к действию стафилококковых b-лактамаз, что может привести к получению большего числа ложноположительных результатов, чем при использовании метициллина. В то же время метициллин в сравнении с оксациллином значительно менее стабилен при хранении, что и ограничивает его применение.

ВАНКОМИЦИНОРЕЗИСТЕНТНЫЙ Staphylococcus aureus

О возможности появления ванкомицинорезистентных штаммов S.aureus стали задумываться около 10 лет назад после сообще ний о появлении резистентности к ванкомицину у энтерококков.

Первое сообщение о выделении метициллинорезистентного S.aureus со сниженной чувствительностью к ванкомицину (МПК 8 мг/л) из клинического материала появилось в 1996 г.

Несмотря на значение МПК к ванкомицину, соответствующее диапазону умеренной резистентности, данный штамм был зарегистрирован как VRSA (ванкомицинорезистентный S.aureus) ввиду клинической неэффективности ванкомицина. У этого штамма не было найдено ни одного из ранее известных механизмов резистентности к ванкомицину; отмечено только увеличение толщины клеточной стенки и концентрации пенициллин-связывающих белков 2 и 2а.

Далее одно за другим последовали сообщения о выделении из клинического материала штаммов S.aureus с МПК к ванкомицину 8 мг/л, обозначенных как VISA (S.aureus со сниженной чувствительностью к ванкомицину).

В результате углубленного исследования ванкомицинорезистентности у MRSA при скрининге более чем 2000 штаммов из различных стационаров было выявлено от 1 до 25%(!) штаммов с гетерогенной (индуцибельной) резистентностью к ванкомицину, экспрессирующих ее с частотой около 1 клетки на 1 млн. Такие штаммы могут являться предше ственниками VRSA.

Специалисты пока не пришли к согласию, какой термин использовать: VRSA или VISA. Это связано с тем, что, несмотря на значения МПК, соответствующие диапазону умеренной резистентности, налицо клиническая неэффективность ванкомицина при терапии VRSA- и VISA-инфекций.

Многие специалисты предлагают свои методы скрининга ванкомицинорезистентности у стафилококков. Однако общепринятые стандарты еще не разработаны.

Таким образом, чрезвычайно важна разработка методов лабораторной диагностики и мониторинга ванкомицинорезистентности, особенно у пациентов, получающих или получавших ванкомицин/ тейкопланин, и при неэффективности этой терапии.

Следует разработать методики контроля за VRSA-инфекциями. Для предупреждения распространения VRSA необходимо изолировать больных и носителей S.aureus. Кроме того, применение антибиотиков должно предусматривать снижение числа необоснованных назначений ванкомицина.