Книга: Методы биохимических исследований
5.2. Материалы матриц сорбентов и обменников
Целлюлоза. Гели на основе декстрана (сефадексы). Агароза. Полиакриламидный гель. Сефакрилы. Ультрогели. Полистирольные смолы. Полиамидные смолы. Кизельгур (целит, диатомовая земля). Силикагель. Окись алюминия. Пористое стекло. Оксиапатит.
5.3. Техника колоночной хроматографии
Хроматография при низком давлении. Хроматографические колонки. Резервуары для элюента. Смесители. Внесение препарата в колонку. Перистальтические насосы. Детекторы. Коллекторы фракций. Вспомогательное оборудование.
Хроматография при высоком давлении. Колонки. Внесение препарата. Задание градиента элюции. Детекторы.
Хроматография при умеренном давлении.
5.4. Гель-фильтрация
Общая характеристика метода. Принцип метода. Коэффициенты распределения. График селективности. Эффективность фракционирования.
Характеристика продажных матриц.
Методические особенности гель-фильтрации при низком давлении. Подготовка матрицы. Набивка колонки. Проверка качества набивки. Определение V 0 . Внесение препарата. Поддержание рабочего режима. Регенерация колонки.
Выбор параметров хроматографического процесса. Выбор матрицы. Размеры колонки. Выбор элюента. Скорость элюции. Оптимизация условий эксперимента.
Области применения. Очистка и фракционирование макромолекул. Определение молекулярной массы белка. Обессоливание и смена буфера.
Гель-фильтрация при высоком давлении. Гель-фильтрация в тонком слое.
5.5. Распределительная хроматография
Принцип метода. Нормальнофазовая распределительная хроматография. Распределительная хроматография в обращенных фазах.
Обратнофазовая гидрофобная хроматография при низком давлении. Немодифицированная сефароза. Элюция снижающимся градиентом концентрации соли. Гидрофобизированные гели агарозы.
Распределительная хроматография при высоком давлении.
5.6. Адсорбционная хроматография
Принцип метода. Сорбенты. Приготовление оксиапатита. Сорбционные свойства оксиапатита. Сорбция белков. Сорбция нуклеиновых кислот. Некоторые особенности хроматографии на оксиапатите. Фракционирование и очистка белков. Фракционирование и очистка нуклеиновых кислот. Разделение двунитевой и однонитевой ДНК. Очистка гибридов ДНК-РНК.
5.7 Ионообменная хроматография
Принцип метода. Компоненты хроматографической системы. Ионообменники. Элюент. Хроматографируемые вещества. Хроматографический процесс. Ионные взаимодействия вещества и сорбента. Управление силой ионного взаимодействия. Неионные взаимодействия вещества и сорбента.
Характеристики продажных ионообменников.
Подготовка обменников к набивке в колонку. Преформирование и промывка. Перевод в нужную ионную форму. Опасность поглощения СО2 .
Применение статической ионообменной хроматографии. Нейтрализация щелочи или кислоты без образования соли. Замена ионов. Обессоливание растворов. Удаление некоторых органических примесей. Концентрирование препаратов. Разделение компонентов смеси, сильно различающихся сродству к обменнику.
Выбор условий динамической ионообменной хроматографии. Выбор ионообменника. Выбор типа элюции. Выбор рН буфера для элюции. Выбор концентрации соли. Сохранение нативности препарата. Выбор объема элюента. Выбор размеров колонки. Выбор скорости элюции. Сбор и обработка фракций. Регенерация ионообменника.
Применение динамической ионообменной хроматографии.
Ионообменная ЖХВД белков.
Хроматофокусирование. Принцип метода. Колонки для хроматофокусирования. Фракционирование белков.
5.8. Аффинная хроматография