Контрольная работа: Оценка спермы по густоте и подвижности спермиев
Необходимые для этого приборы и материалы. Микроскоп, стеклянная трубка диаметром 0,8-1,0 мм (можно использовать трубку от шприца-катетера), предметные стекла, 2 глазные пипетки, стеклянные палочки, песочные часы, 0,01%-ный раствор метиленовой синьки, белая бумага, салфетки.
Активность спермы оценивают по скорости обесцвечивания (восстановления) метиленовой синьки, смешанной со спермой (методика Н.П.Шергина).
При дыхании спермии потребляют кислород, растворенный в смеси, в результате этого синька обесцвечивается. Интенсивность дыхания зависит от концентрации и активности спермиев. Спермии, способные к прямолинейно-поступательному движению, имеют более высокую активность жизненных процессов и дыхания. Следовательно, чем выше концентрация спермиев и чем большее их количество способно к прямолинейно-поступательному движению, тем быстрее расходуется кислород, скорее происходит обесцвечивание метиленовой синьки и, соответственно, выше качество спермы.
Оценку качества свежеполученной спермы по скорости обесцвечивания метиленовой синьки проводят при температуре 18-220 С, т.к. понижение температуры замедляет интенсивность энергетических процессов и дыхания спермиев. При снижении температуры на 100 С интенсивность дыхания уменьшается примерно вдвое, а при 00 С почти прекращается.
Приготовление 0,01%-ного раствора метиленовой синьки . 0,5 г синьки растворяют в 200 мл 1%-ного раствора хлористого натрия и настаивают три дня. Затем готовят рабочий раствор: к 1 части раствора синьки добавляют 9 частей 1%-ного раствора хлористого натрия.
На предметное стекло глазной пипеткой нанести по одной капле краски и спермы и быстро смешать их стеклянной палочкой. Смесь набрать в стеклянную трубочку, чтобы столбик ее был длиной около 2 см. Трубку положить на лист белой бумаги и наблюдать за обесцвечиванием синьки. Обычно она обесцвечивается в середине столбика. На концах столбика могут оставаться голубые кольца, т.к. с концов смесь постоянно обогащается кислородом воздуха. О качестве спермы судят по показателям, приведенным в табл.1
Таблица 1
| Качество спермы | Время обесцвечивания метиленовой синьки (мин.) спермиями | |
| быка | барана | |
| Хорошее | 5-10 | 3-7 |
| Среднее | 11-30 | 8-12 |
| Плохое (непригодное для искусственного осеменения) | более 30 | более 12 |
Для оценки качества спермы жеребца и хряка этот метод не используется, поскольку обесцвечивание смеси метиленовой синьки со спермой затягивается до 60 минут.
Определение процента живых спермиев
Приборы и материалы. Микроскоп, обезжиренные предметные стекла, шлифованные покровные стекла, пипетки, стеклянные палочки, раствор эозина, 96%-ный спирт, салфетки.
Оболочка спермиев, у которых энергично протекают обменные процессы, не пропускает в протоплазму лабораторные краски, поэтому живые спермии не окрашиваются. Мертвые и ослабленные с колебательным движением спермии легко пропускают краску внутрь и, следовательно, окрашиваются этой краской.
Наличие в сперме мертвых и патологически измененных спермиев снижает качество спермы.
Наличие в сперме патологических (уродливых) форм спермиев выше допустимого называется тератоспермией.
Выделяют две группы патологических форм спермиев:
1) с изменением величины и формы головки – гигантские, карликовые, двухголовые, с круглой, грушевидной головкой и др.;
2) с изменениями формы хвоста. Можно также обнаружить спермии с утолщением в области шейки, тела и хвоста в виде протоплазматической капли (незрелые сперматозоиды).
Способы подготовки обезжиренных стекол.
1. Чистые стекла выдерживают в смеси спирта и эфира (соотношение 1:1) в течение суток. Затем извлекают и протирают насухо.
2. После тщательного мытья в растворе детергента предметные стекла промывают в дистиллированной воде, протирают, заворачивают в бумагу и выдерживают в сушильном шкафу не менее 30 минут.
3. Полевой способ. На холодную поверхность электроплиты помещают в один слой чистые стекла. После того как стекла раскалятся, плиту выключают. Дают стеклам остыть.
Рецепт краски . В 100 мл дистиллированной воды растворяют 1,7 г эозина и 3 г цитрата натрия.
На обезжиренное предметное стекло нанести 1 каплю семени и 1-2 капли краски эозина. Капли смешать и ребром шлифованного стекла сделать тонкий ровный мазок. Он должен быстро высохнуть на воздухе. Активные спермии, сохранившие избирательную способность мембран, отталкивают краску и не окрашиваются, неактивные окрашиваются в красный или розовый цвет.
Просмотреть мазок под микроскопом. В каждом поле зрения следует подсчитать количество нормальных и патологических, или живых и мертвых, спермиев. Рекомендуется подсчитать не менее 500 спермиев.
Вычисляют процент неактивных спермиев, он не должен превышать у барана – 14, быка – 18, у жеребца и хряка – 20.
67 Предвестники родов
Роды – физиологический процесс, во время которого из полости матки выводится зрелый плод (плоды) и выделяются околоплодные воды и оболочки – послед. Они наступают по окончанию сроков плодоношения. В сложном комплексе факторов и причин, содействующих наступлению родов, участвуют нервная, эндокринная, половая и другие системы организма самки, а так же сам плод.
Существует множество теорий, объясняющих причины возникновения родов. Согласно одним роды - результат механического воздействия плода на стенки матки и чрезмерного растяжения стенок матки плодом. Эти причины приводят к возбуждению маточных ганглиев (нервных узлов). В результате попытается тонус мышц матки, что побуждает ее к сокращению. Согласно другим роды возникают вследствие нарушения связи между матерью и плодом из-за старения плаценты, а также в результате кислородного голодания в организме матери накапливается больше углекислоты, что возбуждает двигательные центры; плод становится как бы чуждым для материнского организма, что побуждает к его выведению. По другим данным, к концу беременности в организме самки изменяется содержание гормонов: больше становится эстрогенов, релаксина, простагландинов и других и меньше прогестерона; изменяется количество биологически активных веществ: серотонина, симпатина, ветразина, ацетилхолина и др. Все это побуждает материнский организм к выведению плода. По теориям гиперемии половых органов к концу беременности в матке, молочной железе и наружных половых органах скапливается большое количество крови — до 30—50% циркулирующей во всем организме, а также возбуждение спинного мозга активизируется, а коры головного мозга снижается. В результате мышечный тонус матки повышается, и она начинает сильно реагировать на всякие раздражения.
По мнению академика К. К. Скробанского, роды - результат сложных физиологических процессов. Однако для начала их необязательно одновременное действие всех факторов. Нередко какой-либо один импульс (механический, химический, нервный, эндокринный и т. п.) может вызвать роды, а затем в эту функцию постепенно вовлекаются и другие факторы.
Другие авторы считают, что роды - процесс спонтанно возникающих саморегулирующих сокращений мышечных волокон матки. Происходит он на фоне морфологической, биофизической и биохимической готовности органа, что определяется фетоплацентарным комплексом. Только адекватность реакций — материнский организм плюс фетоплацептарный комплекс создает необходимые условия для развития плода и возникновения родов. Роль центральной нервной системы в развязывании родовойдеятельности самая важная. Об этом свидетельствует тот факт, что роды чаще всего начинаются ночью, когда количество импульсов, возбуждающих кору головного мозга извне, уменьшается, и она становится более восприимчивой к импульсам, идущим от рецепторов матки.
К предвестникам родов относят:
1) разрыхление, расслабление связочного аппарата таза, западение крестца. Это наблюдаются за 12—36 ч до начала родов, но нередко за 2— 3 недели до них, а иногда лишь непосредственно перед родами;
2) отечность и увеличение вульвы, выделение из половой щели тягучей, густой слизи (обычно за 1-2 дня до родов)