Курсовая работа: Лабораторные методы исследования крови, мочи у мелких домашних животных
Методика получения образца мочи путем естественного мочеиспускания подразумевает определенную подготовку животного. Проба, взятая в середине процесса мочеиспускания, характеризуется меньшим риском бактериального заражения, возникающего вследствие контакта мочи с участками вокруг наружного отверстия и конечных отделов мочеиспускательного канала [4].
2.2 Физическая и визуальная оценка
Физические характеристики включают в себя измерение объема, фиксирование цвета, прозрачности или мутности, а также удельного веса (SpG) мочи. За исключением удельного веса, все вышеперечисленные характеристики устанавливаются визуально. Объем мочи, образуемой за данный период времени, – это еще один источник информации о почечной функции. Побочное определение состояния гидратации и удельного веса мочи являются наиболее чувствительными индикаторами состояния почечной функции при проведении клинического анализа мочи. Значение удельного веса (SpG) мочи, равное примерно 1,010 изостенурического гломерулярного фильтрата, является показателем способности почек сохранять или выделять воду. У пациентов с нормальной степенью гидратации с низким или нормальным уровнем содержания азота мочевины в плазме и степенью изостенурии почки функционируют нормально, секретируя воду. У обезвоженных, страдающих гиперазотемией с изостенурией пациентов почечная функция, по-видимому, поставлена под угрозу. Вопрос о том, является ли данное изменение первичной или вторичной дисфункцией, решается путем подробного ознакомления с клинической историей заболевания, записями терапевта и проведения дополнительных лабораторных исследований или повторного анализа мочи. Повышенное мочеобразование с низкими значениями удельного веса имеет место при первичной почечной недостаточности и вторичных нарушениях, таких как сахарный диабет, пиометрит (скопление гноя в полости матки) и гиперкортицизм (гиперфункция коры надпочечников), а также при использовании терапевтических диуретиков и кортикостероидов [2].
Нормальная моча кошек и собак бесцветная или имеет светло-желтую окраску в зависимости от соотношения в моче растворенных веществ и растворителя. Более темный цвет нормальной мочи является показателем высокой концентрации раствореного в моче урохрома, а, следовательно, и более высоких значений удельного веса (SpG). Темно-желтая моча содержит высокую концентрацию урохромов, а, следовательно, характеризуется так же высокими значениями SpG. При длительных тренировках контрольных упряжных и охотничьих собак их тренеры судят о состоянии гидратации собак по цвету их мочи. Патологические состояния, диета и прием лекарственных препаратов (например, сульфамидных препаратов) могут изменять цвет мочи. Если моча имеет розовый, красный, коричневый или черный цвет, это указывает на гемоглобинурию или миоглобинурию при миолизисе. Голубая или зеленая окраска мочи позволяет предположить билирубинурию. Окраска хранящейся мочи постепенно изменяется от темно-желтого до темно-зеленого цвета вследствие окисления билирубина и уробилиногена до биливердина и уробилина, соответственно [6].
Мутность свежесобранной мочи является признаком наличия в моче суспендированных эпителиальных клеток, крови, лейкоцитов и бактерий. Охлаждение свежесобранной, концентрированной прозрачной мочи до комнатной температуры или охлаждение в холодильнике приводит к помутнению пробы мочи, поскольку растворимость высококонцентрированных мочевых солей понижается, и они выпадают в осадок. При исследовании мутной мочи под микроскопом видны кристаллы фосфата. Поэтому перед проведением исследования мочи необходимо довести температуру образца мочи до значений комнатной температуры [1].
2.3 Химический анализ мочи
Значение удельного веса мочи имеет большое значение для интерпретации результатов химического анализа и исследований осадка. Многие пациенты потребляют постоянное количество твердой пищи, но воду могут получать по желанию. Это приводит обычно к широкому диапазону различий между значениями очищения воды в почках и, в свою очередь, разбавлению различных растворенных в моче веществ. Таким образом, как показывают результаты химического анализа мочи, количество выводимой воды оказывает большее влияние на концентрацию растворенных веществ или осадка, чем на общее количество образуемого специфического растворенного вещества. Например, моча, удельный вес которой составляет 1,020, содержит вдвое более высокую концентрацию растворенного вещества по сравнению с мочой, удельный вес которой составляет 1,010. Моча с удельным весом 1,030 содержит втрое более высокую концентрацию растворенного вещества по сравнению с мочой, удельный вес которой равен 1,010. Таким образом, протеинурия 1+ в моче с удельным весом 1,010 – это то же самое количество белка, что и 2+ при значении удельного веса 1,020 или 3+ при 1,030.
Для проведения анализа мочи можно использовать самые разнообразные выпускаемые промышленностью индикаторные бумажные полоски. Некоторые могут использоваться для осуществления большего числа тестов, чем другие, но не все тесты применимы к ветеринарной практике. Обычный ветеринарный анализ мочи включает в себя определение значения рН, содержания белков, глюкозы, кетонов, билирубина и крови в моче.
Методика использования сухих реактивов в процедуре с применением измерительного стержня удобна, но часто применяется неправильно. Каждый отдельный тампон с реагентами на палочке содержит полуколичественный химический колориметрический образец, который при контакте с мочой в течение определенного периода времени должен пройти визуальную классификацию по цвету. Для обеспечения стабильности реактивов необходимо строго учитывать время истечения срока хранения реактивов. Солнечные лучи, влажная среда и тепло ускоряют процесс порчи химического реактива. Надежные результаты могут быть получены только при твердом соблюдении в каждом тесте соответствующего инкубационного периода. Особую информацию об образцах можно получить, изучив вкладыш, прилагаемый к упаковке производителем. Обычная практика вынимания измерительных стержней из бутыли приводит к абсорбции сухими реагентами влаги из воздуха и к их порче.
Образцы подразделяются на следующие классы и выражаются в следующих единицах: 0, следы, 1+, 2+, 3+, и 4+ или в мг/дл. Способность классифицировать по цвету у разных людей сильно различается; люди с цветовой ахроматопсией сталкиваются с трудностями в классифицировании изменений цвета. Лучше пользоваться методикой фиксирования результатов с помощью шкалы от 0 до 4+, чем, выражая изменения цвета в единицах мг/дл, поскольку первый способ поддерживает полуколичественный характер данного анализа, в то время как последний создает ложное чувство уверенности в чувствительности, данной процедуры [1].
Белки. Результаты анализа белков мочи должны интерпретироваться на базе значений удельного веса. Протенурия 1+ у собак с удельным весом мочи SpG более 1,035 является нормой, тогда как устойчивое значение 1+ белков с SpG менее 1,035 требует дальнейших исследований. В отсутствие гематурии / пиурии (наличия гноя в моче) происхождение устойчивой протеинурии связано: с повышенным содержанием гломерулярно-отфильтрованного альбумина, обусловленным повышенным гидростатическим давлением, гломерулонефритом или гломерулярным амилоидозом (амилоидной дистрофией); нарушением механизма абсорбции в почечных канальцах (в основном с мягкой протеинурией) при хроническом интерстициальном (межуточном) нефрите или врожденной панцитопенией (анемией или синдромом Фанкони); с повышением гломерулярной экскреции белков, связанной с незлокачественной и злокачественной гиперглобулинемией, включая миелому клеток плазмы, при которой выводится белок Бенс-Джонса. Другие причины протеинурии включают в себя стресс, лихорадочное состояние, физическую нагрузку и гипертермию (перегревание организма).
В ветеринарной лаборатории должны проводиться как колориметрические, так и нефелометрические исследования (т.е. тест на преципитацию с сульфосалициловой кислотой – APT). При проведении процедуры определения белков с помощью измерительного стержня применяется цветовой индикатор тетрабромфенол, который при значении pH 3 изменяет цвет от желтого до синего. Результаты выражаются в баллах: следы, 1+, 2+, 3+ или 4+. Будучи надежным для определения альбумина, метод определения белков с помощью измерительного стержня, не определяет глобулины или белки Бенс-Джонса при множественной миеломе. Ложно-положительные результаты – это обычное явление, которое обусловлено истощением буферности реагентного тампона вследствие длительного контакта реактива с высоко-буферной, щелочной или загрязненной (антисептиками, такими как хлоргексин или детергентные вещества) мочой. Ложно-положительные результаты настолько часто получаются, что необходимо подтверждать все положительные результаты анализа белков с применением измерительного стержня с помощью теста APT (рис. 2.3.)Нефелометрическое исследование APT представляет собой очень простую процедуру, при которой помутнение, возникающее в результате смешивания равных частей мочи и раствора сульфосалициловой кислоты, оценивается по шкале: 0, следы, 1+, 2+, 3+ и 4+. Данная кислота относится к разряду слабых кислот, безопасна при хранении, при работе с ней пользуются теми же инструментами, что и измерительный стержень, она продается в форме таблеток, которые можно растворить в определенном объеме воды [1].
Для проведения этого теста требуется 5% раствор сульфосалициловой кислоты. Тест осуществляется путем смешивания равных частей мочи и данного раствора. Слева направо: отрицательный белок в моче, 2+ белок, характеризующийся определенной мутностью, и 4+ белок, который обнаруживается в виде осадка.
Значения pH . рН мочи собак и кошек варьируют между 5,5 и 7. Значения pH изменяются в зависимости от диеты: животные, которых содержат на диете с высоким содержанием мяса, склонны иметь кислую мочу вследствие выведения с мочой большого количества сульфатных и фосфатных солей, тогда как моча животных, содержащихся на диетах богатых овощами, имеет щелочную среду. Транзиторное понижение кислотности мочи после приема пищи сопровождается повышением значения pH мочи. Некоторые бактерии, населяющие мочевые пути, обладают способностью расщеплять мочу с формированием аммиак-образующей щелочной мочи. В этих случаях изменение или отсутствие изменений pH может свидетельствовать об успешной или неуспешной терапии, или о рецидиве инфекции мочевых путей.
Глюкоза. Глюкоза, которая имеет большое значение для жизни, хорошо сохраняется в организме и отсутствует в моче нормальных животных. Любая глюкозурия должна пройти тщательную оценку с целью выяснения, носит ли она стойкий, периодический или временный характер. Наличие глюкозы в моче отражает аккумулятивный клиренс глюкозы почками за определенный период времени, тогда как значения содержания глюкозы в крови находятся в динамическом состоянии и характеризуют содержание глюкозы в крови в данной точке в данный момент времени. Периодическая и временная формы глюкозурии связаны с более высокими значениями содержания глюкозы в крови, чем при пороговой временной гипогликемии (примерно 180 мг/дл), которая возникает после приема пищи.
Временная физиологическая глюкозурия, вызванная стрессом, более ярко выражена у кошек, чем у собак, и может быть причиной транзиторной глюкозурии. Эта транзиторная глюкозурия часто проявляется в форме эугликемии, если данное животное перенесло какой-то стресс, например, было сбито машиной за несколько часов до того, как были взяты пробы мочи и крови. Патологическая глюкозурия сахарного диабета сопровождается стойкой гипергликемией. При преддиабете имеет место перемежающаяся глюкозурия при устойчивом нормальном содержании глюкозы в плазме [1].
У собак и кошек периодическая или транзиторная гипергликемия и глюкозурия являются обычными явлениями при преддиабете, возникающем после приема пищи, преддиабете, который лечится стероидами, и преддиабетах со стресс-индуцированной печеночной гликогенолитической транзиторной гипергликемией, вызванной травмой. Самопроизвольный и терапевтический гиперкортицизм указы?