Реферат: Определение уроновых кислот и полиуронидов

Для проведения гидролиза полиуронидов и полисахаридов отбирают пипеткой 5 см³ раствора пектиновых веществ в кругло-донную колбу вместимостью 25 см³ , добавляют пипеткой 5 см³ раствора серной кислоты концентрацией 4 моль/дм³ , вносят стеклянные «кипятильники» и кипятят с обратным холодильником на электрической плитке в течение 3 ч.

Гидролизат охлаждают до комнатной температуры и нейтрализуют равным объемом раствора карбоната натрия концентрацией 2 моль/дм³ . Нейтрализацию из-за сильного вспенивания проводят в высокой пробирке. Можно нейтрализовать не весь, а только часть гидролизата, достаточную для последующего анализа.

Для проведения анализа углеводных компонентов в пробирку с конусом типа П4 вместимостью 10 см³ пипеткой вносят 0,5 см³ нейтрализованного гидролизата, добавляют пипеткой 4 см³ о-толуидинового реагента и перемешивают содержимое. Параллельно в другой пробирке готовят раствор сравнения. Обе пробирки нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 мин. Затем пробирки охлаждают до комнатной температуры, переливают растворы в кюветы с толщиной слоя 1 см³ и на спектрофотометре измеряют оптические плотности раствора при аналитических длинах волн 365, 385 и 630 нм, используя в качестве раствора сравнения смесь воды и OTP.

В такой же кювете измеряют оптическую плотность контрольного раствора — нейтрализованного гидролизата, разбавленного в 9 раз для учета разбавления при анализе с OTPпри длинах волн 365 и 385 нм, используя в качестве раствора сравнения дистиллированную воду.

Для расчета коэффициентов поглощения строят градуировочные графики для используемого спектрофотометра по растворам чистых Сахаров

Вывод уравнений и расчет коэффициентов. В применении к анализируемому раствору Сахаров уравнения Фирордта будут иметь вид

где D₃₆ Sи D₃₈₅ — оптические плотности анализируемого раствора

при длинах волн 365 и 385 нм за вычетом поглощения гекеоз; с, и 'Ci—концентрации соответственно пентоз и галактуроновой кислоты, мкг/см³ ;— коэффициенты поглощения продуктов реакции с OTP пентоз и галактуроновой кислоты при длинах волн 365 и 385 нм; d— толщина кюветы, см, d= 1 см.

Решая систему двух уравнений, получают уравнения для расчета концентрации, мкг/см³ , пентоз

C = ZiD₃₈₅ -SD₃₆₅

и галактуроновой кислоты

2=CD₃₆₅ — ED_{is 5} ,

где соответствующие коэффициенты будут равны

Расчет массовой доли пектиновых веществ. После расчета концентрацией, мкг/см³ , галактуроновой кислоты C_i , пентоз C_l и гекеоз рассчитывают массы полисахаридов и полиуронидов с учетом общего объема раствора пектиновых веществ, разбавленийзпри гидролизе и нейтрализации и коэффициентов пересчета моносахаридов в полисахариды:

Галактуронан = с_гму · 400 · 0,907 · IO^- Y Пентозаны = с_п< ._нтоз · 400 · 0,88 · 10"⁶ г, Гексозаны = с_гексоэ · 400 · 0,90 · IO ^- V

Затем рассчитывают общую массу пектиновых веществ как сумму масс всех полисахаридов и полиуронидов т_пв = галактуронан + пентозаны -4- гексозаны.

Массовую долю пектиновых веществ X_nii ,% к исходной абсолютно сухой древесине, рассчитывают по формуле

где т_па — масса пектиновых веществ, г; g— масса абсолютно сухой навески обессмоленной древесины, г; K₃ — коэффициент экстрагирования органическим растворителем.

Построение градуировочных графиков. Готовят по пять растворов чистых Сахаров концентрацией 40, 80, 120, 160 и 200 мкг/см³ . Каждый раствор обрабатывают OTP в условиях определения пектиновых веществ и измеряют оптические плотности при 365 и 385 нм, а для растворов глюкозы — дополнительно при 630 нм и строят соответствующие графики, откладывая по оси абсцисс концентрации растворов, мкг/см³ , а по оси ординат — значения оптической плотности D.