Реферат: Свободная субъединица хорионического гонадотропина человека как маркер синдрома Дауна
В пренатальной диагностике корреляция концентрации какого-либо маркера, в том числе свободной β-субъединицы ХГЧ, с патологией оценивается статистически – по вкладу в вероятность рождения больного ребенка, рассчитываемую на основании нескольких факторов. Все факторы риска, биохимические и ультразвуковые, оценивают в единицах МoМ (multiplies of median, кратности медиане). Затем с помощью специальных статистических программ рассчитывается вероятность рождения ребенка с синдромом Дауна с учетом возрастного риска [32, 33].
С 1993 года были проведены скрининговые исследования, в которых была установлена целесообразность использования свободной β-ХГЧ для скрининга синдрома Дауна в первом триместре [8]. Данные этих исследований представлены в табл. 1.
Таблица 1
Содержание свободной β-субъединицы ХГЧ в крови женщин в первом триместре беременности при наличии синдрома Дауна у плода.
| Авторы | Количество случаев синдрома Дауна | Среднее значение (МоМ) |
| Macri e.a. [34] | 38 | 2.20 |
| Macintosh e.a. [35] | 21 | 2.10 |
| Kranz e.a. [8] | 22 | 2.09 |
| Haddow e.a. [36] | 48 | 2.13 |
Таким образом, при синдроме Дауна концентрация свободной β-ХГЧ в 2 с лишним раза выше, чем значение для выборки в целом.
Характеристика эпитопов β-субъединицы ХГЧ
Развитие высокоспецифичных и чувствительных иммунохимических методов для определения свободной β-ХГЧ в крови основано на отборе моноклональных антител, способных отличать свободную β-ХГЧ от остальных метаболитов гормона. Антитела, специфически связывающие свободную β-субъединицу, впервые были получены в 1981 г. [37]. После этого было описано большое количество антител, однако четкое представление о расположении антигенных областей β-ХГЧ появилось только после изучения ее кристаллической структуры. Многочисленные исследования методами биохимической, в т.ч. энзиматической модификации, изучение кросс-реактивности в конкурентных иммуноанализах, с помощью искусственных синтетических пептидов и рентгеноструктурного анализа привели к выяснению эпитопной карты β-ХГЧ, свободной β-субъединицы и продуктов ее деградации.
Установлено, что свободная β-ХГЧ имеет четыре пространственно разделенных антигенных домена [38]. Два из них локализованы в С-терминальной области β-ХГЧ и являются небольшими слабо иммуногенными областями, состоящими каждая из одного эпитопа (113-116 и 137-144 аминокислотные остатки) [39]. Третий домен также представлен одним эпитопом, локализованным вблизи от «цистинового узла» с аргинином в положении 60 в качестве главной детерминанты, и является также слабо иммуногенным. Четвертый домен демонстрирует высокую иммуногенную активность и представлен четырьмя эпитопами в области β-кор-фрагмента. Кроме того, к этому домену также относится один из двух эпитопов, специфичных только для свободной β-ХГЧ (табл. 2) [40].
Таблица 2
Распределение эпитопов на дериватах ХГЧ.
«+» – присутствие эпитопа на молекуле, «–» – отсутствие.
| Эпитоп | ХГЧ |
Свободная β-ХГЧ |
β-кор- фрагмент |
| β1 | + | + | + |
| β2 | + | + | + |
| β3 | + | + | + |
| β4 | + | + | + |
| β5 | + | + | + |
| β6 | - | + | + |
| β7 | - | + | + |
| β8 | + | + | - |
| β9 | + | + | - |
| β10 | - | - | + |
| β11 | - | - | + |
| β12 | - | - | + |
| β13 | - | - | + |
Из этих данных видно, что на свободной β-ХГЧ выявляются только два эпитопа (β6 и β7), антитела к которым не взаимодействуют с молекулой ХГЧ.
Коммерческие тест-системы для определения содержания свободной β-субъединицы ХГЧ в сыворотке крови
Из вышесказанного ясно, что сложность создания иммунометрической тест-системы для определения концентрации свободной β-ХГЧ связана с большим количеством метаболических форм ХГЧ, содержащихся в крови, и перекрестной реакцией антител с ними. В связи с тем, что β-ХГЧ составляет не более 3% от всех дериватов ХГЧ, для конструирования одностадийной системы необходимы высокочувствительные и специфичные только к свободной β-субъединице антитела [23]. По последним данным, охарактеризовано всего два антитела, специфически связывающиеся со свободной β-ХГЧ (табл. 2).
При обзоре коммерческих тест-систем (табл. 3), оказалось, что только в одной из них используются два антитела, специфичные к свободной β-ХГЧ, что позволило производителю (Wallac OY, Финляндия) [41] создать одностадийный вариант анализа. Все остальные компании предлагают двустадийный анализ. Можно предположить, что во всех этих системах только нижнее антитело имеет специфичность к свободной β-субъединице, а верхнее – к полной молекуле ХГЧ.
Таблица 3
Аналитические характеристики коммерческих тест-систем для определения концентрации свободной β-субъединицы ХГЧ в сыворотке крови («–» означает, что данные не найдены)
| Комания | Антитела | Метод анализа |
Диапазон, чувствительность, хук-эффект (мМЕ/мл) |
| Wallac OY, Финляндия |
Оба к свободной β-ХГЧ |
Одностадийный флуороиммуно- метрический |
0-200 0,2 К-во Просмотров: 206
Бесплатно скачать Реферат: Свободная субъединица хорионического гонадотропина человека как маркер синдрома Дауна
|