Учебное пособие: Методы физиологических исследований
Методика: 1. У животного взять 1-1,5 мл крови (из хвостовой вены или бедренной вены);
2. Кровь отцентрифугировать в течение 10 мин при 2000 об/мин;
3. Отделить плазму от форменных элементов и перенести ее в пробирку с притертой пробкой. Плазмы должно быть 1 мл или довести до этого количества бидистиллятом.
4. В пробирку добавить 6 мл гексана, встряхивать в течение 20 с. При этом у плазмы удаляется холестерин. Удалить отработанный гексанс помощью водоструйного насоса.
5. Добавить хлороформа 10 мл, встряхивать в течение 1 мин. При этом кортикостероиды растворяются в хлороформе. Оставшуюся фракцию плазмы удалить насосом.
6. Экстракт промыть 0,1 М раствором NaOH, добавляя по 1 мл. Встряхиваем 1 мин и удаляем водоструйным насосом.
7. 1 мл воды бидистиллируем, а дальше встряхиваем 1 мин и удаляем водоструйным насосом.
8. После отобрать 8 мл экстракта и перенести в чистую сухую пробирку с притертой пробкой.
9. В экстракт добавить 6 мл смеси абсолютного спирта (этилового) с H2 SO4 , которая выдерживает пробу во Савамо. Соотношение спирта и кислоты 1:3 (3 спирта и 1 кислоты). Встряхивают в течение 1 мин и оставляют на холоде в теплом месте в течение часа. При этом в смеси кислоты со спиртом растворяются кортикостероиды. После этого определяется объем 11-ОКС с помощью спектрофотометра «Квант».
Оборудование: двойной набор пробирок с притертой пробкой, штативы, центрифужные пробирки, водоструйный насос, 3 ппипетки по 1 мл, 2 пипетки на 10 мл, 1 пипетка на 6 мл.
Реактивы : бидистиллят, гексан, 0,1 раствор NaOH, хророформ, 100% этиловый спирт, H2 SO4 по Савамо (100%).
Методы исследования эмоционального статуса у крыс
1. Тест открытого поля
Латентный период выхода из центрального квадрата, число пересеченных линий, вертикальных стоек, обследованных отверстий, умываний, дефекаций. По продолжительности латентного периода выхода из центрального квадрата и числу пересеченных линий судили о двигательной активности, по количеству вертикальных стоек и обследованных отверстий – об исследовательской деятельности, число умываний говорит об эмоциональном состоянии, а по количеству дефекаций судили о тревожности.
2. Многопараметрический метод определения тревожно-фобического статуса крыс
Цель: оценить комплексную характеристику индивидуального тревожно-фобического уровня животного.
Методика: исследование проводят в открытом поле при электрическом освещении 3000 люкс в фиксированное время.
Тест 1. Латентный период спуска с высоты. Данный тест используется для оценки интенсивного оборонительного поведения у крыс. Крысы помещаются на пенал из непрозрачного материала размером 20х14х14 см и отмечается время спуска с пенала, когда крыса коснется всеми 4 лапами поля.
Тест 2. Латентный период прохождения через отверстие. Крыса помещается в прозрачный пенал, разделенный поперек на 2 отсека с отверстием 7х10 см в перегородке. Действие считается выполненным, когда крыса перелезает во 2 отсек двумя лапами. При наличии колебаний при выполнении действия, заглядывания в отверстие или начатый, но не завершенный перенос оценки на 0,5 балле.
Тест 3. Время выхода из домика. Животное помещается в домик из прозрачного плексигласа 16х15х12 см и выход на 15 мин закрывается заслонкой. Отчет времени начинается с момента открытия выхода. В тестах 1-3 крысу из экспериментальной обстановки возвращали не ранее, чем через 20 мин после выполнения соответствующего действия или по истечению времени тестирования (180 с) в случае невыполнения действия. Интервалы между тестами не менее 15 мин.
Тест 4. Выход из центра открытого поля. Этот тест позволяет выявить реакции страха, связанные со снижением двигательной активности. Тестирование начинали с помещения крысы в центр поля и с этого момента фиксировали время, за которое животное посещало 4 центральных квадрата.
По тестам 1-4 оценки выставлялись в соответствии со шкалой:
| № теста | Время выполнения, с | оценки |
1 | 0<t<30 30<t<60 60<t<180 не спуск за 180 | 0 1 2 3 |
2 | 0<t<30 30<t<60 60<t<180 не выход за 180 | 0 1 2 3 |
3 | 0<t<15 15<t<30 30<t<180 свыше | 0 1 2 3 |
4 | 0<t<15 15<t<30 30<t<60 свыше | 0 1 2 К-во Просмотров: 910
Бесплатно скачать Учебное пособие: Методы физиологических исследований
|