Дипломная работа: Антиатеросклеротическое действие смеси масел льна и расторопши с селенопираном
За результат измерения принимают среднее арифметическое значение двух параллельных измерений.
2.3.3. Определение концентрации общего холестерина (ХСобщ ) в сыворотке и плазме крови энзиматическим колориметрическим методом
ПРИНЦИП МЕТОДА. При гидролизе ЭХС холестеразой образуется свободный ХС. Образуется и имеющийся в пробе ХС: окисляется кислородом воздуха под действием холестеролоксидазы с образованием эквимолярного количества перекиси водорода. Под действием (РОД) перекись водорода окисляет хромогенные субстраты с образованием окрашенного продукта. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации в пробе.
Набор реагентов : CHOLESTEROL «E – D» («Vital-Diagnostics»)
ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
| Реагенты |
Опытные пробы,(мл.) | Калибровочные пробы, (мл.) | Контрольные пробы, (мл.) |
| Сыворотка или плазма | 0,02 | _ | _ |
| Физ. Раствор (H2 O) | _ | _ | 0,02 |
| Реагент 2 | 2,0 | 2,0 | 2,0 |
| Раствор холестерина | _ | 0,02 | _ |
Реакционную смесь перемешивают и инкубируют не менее 5 мин при комнатной температуре (20-25°С) или при 37°С и измеряют оптическую плотность опытных и калибровочных проб против контрольной пробы в кювете с толщиной поглощающего слоя 5 см (1 см.) при длине волны 500 нм (ФЭК- 490 нм). Окраска стабильна не менее 2-х часов после окончания инкубации при предохранении от прямого солнечного света.
Расчет концентрации холестерина проводят по формуле:
С = [Ео /Ест ] * 5,17 (ммоль/л) или С =[ Ео /Ест ] * 200 (мг/100 мл)
Ео и Ест – экстинция образца и стандарта, измеряется относительно контрольной пробы.
2.3.4. Определение концентрации триглицеридов (ТГ) в сыворотке и плазме крови энзиматическим колориметрическим методом
Тглицериды липаза глицерин + жирная кислота
Глицерин + АТФ глицерокиназа глицерил-3-фосфат +2 H2 O
Глицерил-3-фосфат + O2 ГФО диоксиацетон фосфат +2 H2 O
H2 O2 + 4-ААР + 4-хлорфенол пероксидаза хинонимин + 4H2 O
Набор реагентов : TRIGLYCERIDES «E – D» («Vital-Diagnostics»)
ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
| Реагенты | Опытные пробы, (мл.) | Калибровочные пробы, (мл.) | Контрольные пробы, (мл.) |
| Сыворотка или плазма | 0,02 | _ | _ |
| Физ. Раствор (H2 O) | _ | _ | 0,02 |
| Реагент | 2,0 | 2,0 | 2,0 |
| Стандартный раствор | _ | 0,02 | _ |
Реакционную смесь перемешивают и инкубируют не менее 5 мин при комнатной температуре (20-25°С) и измеряют оптическую плотность опытных и калибровочных проб против контрольной пробы в кювете с толщиной поглощающего слоя 5 см (1 см.) при длине волны 505 нм (ФЭК- 490 нм). Окраска стабильна не менее часа после окончания инкубации при предохранении от прямого солнечного света. (таблица).
Расчет концентрации триглицеридов проводят по формуле:
С = [Ео /Ест * 250] – 10 (мг/100мл) или С = [Ео /Ест * 2,85] – 0,11ммоль/л
Ео и Ест – экстинция образца и стандарта, измеряется относительно контрольной пробы. 10 мг/100мл (0,11ммоль/л) – поправка на содержание свободного глицерина в сыворотке (плазме крови).
2.3.5. Определение концентрации ХС-ЛВП (холестерина-липопротеидов высокой плотности) (HDL) в сыворотке и плазме крови
ПРИНЦИП МЕТОДА.Хиломикроны, липопротеиды низкой плотности (LDL) и липопротеиды очень низкой плотности (V LDL) осаждаются при добавлении к образцу фосфовольфрамат/Mg²+ . После центрифугирования в супернатанте остаются толькоHDL, концентрация которых определяется так же как концентрация общего холестерина.
Набор реагентов : HDL CHOLESTEROL «FL - E» («Vital-Diagnostics»)
ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
1. Преципитация
| Реагенты | Опытные пробы, (мл.) | Калибровочные пробы, (мл.) | Контрольные пробы, (мл.) |
| Сыворотка или плазма | 0,15 | _ | _ |
| H2 O | _ | _ | 0,15 |
| Осаждающий реагент | 0,3 | 0,3 | 0,3 |
| Раствор холестерина | _ | 0,15 | _ |
Хорошо перемешать и оставить на 10 мин при комнатной температуре. Опытные пробы отцентрифугировать в течение 10 мин при 4000g или 1-2 мин 1000g. Прозрачный супернатант использовать для определения концентрации HDL. Калибровочные и контрольные пробы центрифугировать не нужно. Определение холестерина во всех пробах в течение часа.
2. Определение концентрации HDL
| Реагенты | Опытные пробы, (мл.) | Калибровочные пробы, (мл.) | Контрольные пробы, (мл.) |
| Супернатант | 0,2 | _ | - |
| H2 O+ реагент №1 | _ | _ | 0,2 |
| Рабочий реагент для определ. холестерина | 0,2 | 0,2 | 0,2 |
| Раствор холестерина+реагент №1 | _ | 0,2 | _ |
Реакционную смесь тщательно перемешивают и инкубируют не менее 10 мин при комнатной температуре (20-25°С) или 5 мин при 37°С и измеряют оптическую плотность опытных и калибровочных проб против контрольной пробы в кювете с тол