Курсовая работа: Методы выделения антибиотиков
60
83
20
57
44
29
27
12
50
21
Ро
Ро
Ро
Ж
Ро
Ро
Ро-Ко
Ро-Ко
Ж
Ж-Ро
Ж-Ро
Авторы работы разделяли тетрациклин, хлортетрациклин, диметилхлортетрациклин и их ангидро- и эпипроизводные на промытом кислотой кизельгуре G, пропитанном 20 %-ным раствором полиэтиленоксидгликоля 400 в смеси глицерин — 0,1 М ЭДТА при рН 7 (1 : 19). Разделяющим растворителем был органический слой смеси этилацетат — 0,1 М ЭДТА, рН 7 (6:1). При рассмотрении пластинок в длинноволновом УФ-свете можно обнаружить 0,05 мкг антибиотика. В работе описана методика разделения тетрациклинов и продуктов их превращения на кизельгуре, пропитанном ЭДТА; величины Rf и применявшиеся растворители указаны в табл. 1.2.
Количественное определение ангидротетрациклинов в разложившихся таблетках тетрациклина проводили, экстрагируя зоны ТСХ и измеряя коэффициент поглощения при 428 нм . При определении эпитетрациклина и хлортетрациклина зону первого соскребали, элюировали 0,1 н. соляной кислотой и измеряли поглощение элюента при 356 нм. Хлортетрациклин после элюирования 0,2 н. гидроксидом натрия измеряли по интенсивности флуоресценции в области 414 нм (длина возбуждающего излучения 356 нм). Радека и Вильсон проводили определение тетрациклина в фармацевтических препаратах in situ. Хотя этот метод менее точен, чем спектрофотометрический метод Альварца Фернандеца и др., он более чувствителен, требует меньше времени и более точен, чем официальные микробиологические методы. Ван Хоек и др. разработали для этой группы соединений флуорометрический метод определения in situ.
ПЕПТИДНЫЕ АНТИБИОТИКИ
Полимиксиновые антибиотики представляют собой пептиды очень близкого строения. Кроме аминокислот в их молекулу входят жирные кислоты. Иглой и др.разделяли поли-миксины В, D и М на силикагеле G, используя смесь ацетон— вода—уксусная кислота—2 н. гидроксид аммония (15:5:1:2). Полимиксин Е (колистин) не удается отделить от полимик-сина В. Хоулетт и Зельцер разработали метод дифференциации этих двух соединений: пробу гидролизуют 5 н. соляной кислотой в запаянной трубке 6 ч при 120°С и определяют аминокислотный состав хроматографически в камере с насыщенной атмосферой на слое силикагеля MNG, используя раствор 68 мг иодида калия в 84 мл 90 %-ного фенола и 16 мл воды. Нингид-риновая проба позволяет обнаружить L-2,4-диаминомасляную кислоту, L-треонин, фенилаланин и лейцин в пробе полимиксина В, в то же время при хроматографировании колистина пятно фенилаланина обнаружено не было. Хамерс и Моерлуз предпочитают проводить 22-часовой гидролиз при ПО "С, чтобы избежать появления ложных пятен.
Хиномициновые антибиотики — это пептидные лактоны с хи-ноксалиновым кольцом, отличающиеся друг от друга только своей N-метиламинокислотной долей. Шой подвергал хро-матографическому разделению соединения А, В, Во, С, D и Е методом круговой хроматографии на оксиде алюминия, применяя нижнюю фракцию смеси этилацетат—1,1,2,2-тетрахлор-этан—вода (3:1:3). Таким способом удалось разделить все компоненты, кроме В и Во. Хроматографирование проводили на флуоресцентном слое и рассматривали пластинки в УФ-свете.
Штудер и др. при определении строения энниатина В синтезировали ряд циклических пептидов с активностью антибиотиков. В смеси бензол—эфир—метанол (17:2: 1) на силикагеле энниатины А и В характеризуются Rf 0,39.
ПОЛИЕНОВЫЕ МАКРОЛИДНЫЕ АНТИБИОТИКИ
Икекава и др. разделили шесть полиенов на силикасиликагеле G, используя смесь н-бутанол—уксусная кислота—вода (3:1:1), и получили при этом следующие величины Rf. нистатин 0,18; пимарицин 0,34; унамицин А 0,36; амфотерицин А 0,33; пентамицин 0,67 и трихомицин 0,17. Бержи и Эбле разделили на силикагеле HF, забуференном смесью 0,2 М ди-гидрофосфат калия—0,2 М гидрофосфат натрия (1:1), элюи-руя пробу смесью метиленхлорид—мета«ол (17:3). Выделенные компоненты характеризуются следующими величинами Rf. I 0,8; II 0,7; III 0,6; IV 0,5. Охаб разделил на силикагеле трихомицин, фумагиллин, натамицин, нистатин, амфотерицин А и амфотерицин В. Лучшие результаты дают смеси этанол— аммиак—вода—диоксан (8:1:1:1) и н-бутанол—пиридин— вода (3:2: 1). Мартин и Мак-Даниел разделили комплекс кандигексина на силикагеле G на пять компонентов со следующими величинами Rf. А 0,26; В 0,29; D 0,36; Е 0,39 и F о',43. Комплекс кандидина удалось разделить на две фракции с Rf 0,27 (А) и 0,32 (В). Третий компонент с Rf 0,36, о наличии которого в сырых препаратах кандидина сообщили Боровский и др., в очищенных препаратах обнаружить не удалось. Элюирование проводилось нижней фракцией смеси хлороформ— метанол—20 %-ный гидроксид аммония (2:2:1). Количественное разделение достигается денситометрированием in situ кандигексина при 340 нм и кандидина при 360 нм.