Лабораторная работа: Токсикология

Раствор Л£ 3. К 1,8 мл раствора № 1 добавляют 0,2 мл 1 %~ного раствора ацетилхолинхлорида (9:1).

Принцип метода основан на определении интенсивности угнетения активности ацетилхолинэстеразы при инку­бации нормальной сыворотки крови лошади, экстракта из патматериала и раствора ацетилхолинхлорида. Сте­пень угнетения фермента устанавливают по изменению окраски бромтимолового синего под воздействием обра­зующейся уксусной кислоты от синей до зеленовато-желтой.

Ход анализа . К 25 г измельченной навески до­бавляют 25 мл бензола и экстрагируют при помешива­нии в течение 1 ч. 0,025 мл экстракта микропипеткой вводят в уленгутовскую пробирку. Туда же добавляют 0,025 мл лошадиной сыворотки крови и 2 мл раствора № 3. Одновременно готовят колориметрический стан­дарт (раствор № 2) и контроль. В контрольную пробир­ку вместо экстракта заливают дистиллированную воду. По скорости изменения окраски от интенсивно-синего до желтого в пробирке с исследуемым экстрактом по срав­нению с контролем определяют наличие или отсутствие фосфорорганического пестицида в пробе.

Этот метод используют для определения остатков ДДВФ, диброма, циодрина; после концентрирования экстрактов — хлорофоса и амидофоса.

Тема: ВЕЩЕСТВА, УСИЛИВАЮЩИЕ СОКРАЩЕНИЕ МАТКИ

Влияние окситоцина на изолированный рог матки

Материальное обеспечение: мышь; физиологический раствор раствор окситоцина в ампулах; ножницы изогнутые и глазные, зонд с ушком, пинцеты Пеана, иголка с нитками, кимограф с лентой, вата, скаль­пель, пипетки, сливательная чашка.

Ход работы:

На ленте кимографа записывают сокращения изолированного рога матки. В стаканчик на каждые 100 мл питающей жидкости добавляют 1...2 капли раствора окситоцина, содержащего в 1 мл 10 ЕД препарата. Отмечают уси­ление сокращений рога матки, повышение ее тонуса вплоть до спазма.

Вывод:

Окситоцин усиливает сокра­тительную способность матки.

Тема: ПРОТИВОПРОТОЗОИНЫЕ ВЕЩЕСТВА

Действие этакридина лактата на простейших.

Материальное обеспечение: лягушка; эфир, растворы этакридина лактата (1 : 500) и изотонический натрия хлорида; колпак, вата, препаровальная доска, ножницы, скальпель, пинцет, предметные стекла.

Ход работы:

У обездвиженной под наркозом лягушки делают соскоб со сли­зистой прямой кишки и помещают его на предметное стекло в предварительно нанесенную каплю изотонического раствора на­трия хлорида. Под небольшим увеличением микроскопа отмечают движение гельминтов (опалинов). При внесении капли раствора этакридина лактата (1 : 500) движения опалинов замедляются и прекращаются.

Тема: Вещества отдающие кислород

Влияние перекиси водорода, калия перманганата и формальдегида на простейших.

Материальное обеспечение : лягушка; 0,6%-й раствор натрия хлорида, 3%-й ра­створ перекиси водорода, 1%-й раствор калия перманганата, 2%-й раствор фор­мальдегида; пипетка глазная, микроскоп, четыре часовых стекла.

Ход работы:

Содержимое прямой кишки лягушки, разведенное 0,6%-м ра­створом натрия хлорида (получение содержимого см. «Влияние фенола на простейших»), наносят по одной капле на четыре часо­вых стекла. Под малым увеличением микроскопа убеждаются в подвижности простейших. Наносят по одной капле на первое стекло 3%-го раствора перекиси водорода, на второе — 1%-го ра­створа калия перманганата, на третье — 2%-го раствора формаль­дегида. Отмечают прекращение подвижности простейших только на первых трех стеклах. Вывод: этакридина лактат, перекиси водорода, калия перманганат и фор­мальдегид убивают простейших.

Тема: МЕТОДЫ ИЗВЛЕЧЕНИЯ ЯДОВИТЫХ ВЕЩЕСТВ ИЗ КОРМА И ПАТМАТЕРИАЛА

Цель занятия: освоить методы извлечения ядовитых веществ из корма и патматериала

Материадьное обеспечение: химическаая посуда, колба Кьельдаля, воду дистиллированная, ацетон, хлороформ, н-гексан и другие органические растворители, пробы корма и патматериал.

Ход работы:

Основные методы извлечения ядов — экстракция жид­костями, изоляция минерализацией и отгонкой с водя­ным паром.

В зависимости от растворимости ядовитых веществ для экстракции используют воду, ацетон, хлороформ, н-гексан и другие органические растворители.

Минерализацию осуществляют серной кислотой и пергидролем, соляной кислотой и калия хлоратом, а также методом сухого озоления.

Для минерализации серной кислотой и пергидролем берут 20—25 г патматериала в колбу Кьельдаля на 500 мл, заливают 10—12,5 мл пергидроля, тщательно смешивают и добавляют 6—7 мл концентрированной серной кислоты. После ослабления бурной реакции со­держимое колбы осторожно подогревают на газовой горелке или электроплите, периодически добавляя по 1—2 мл пергидроля до тех пор, пока оно не станет про­зрачным и не будет темнеть при дальнейшем нагрева­нии.

В полученном минерализате можно экспресс-мето­дом обнаружить ртуть, медь, цинк и мышьяк.

Для минерализации соляной кислотой и калия хло­ратом (бертолетовой солью) берут 20—25 г патматериа-ла в колбу Кьельдаля, заливают соляной кислотой, по­догревают и добавляют небольшими порциями калия хромат до тех пор, пока жидкость не станет прозрачной. В минерализате экспресс-методом можно обнаружить свинец и барий.

Отгонку с водяным паром применяют для извлечения синильной кислоты, формальдегида, фенола, некоторых ХОС, ФОС и других веществ.

Перегонный аппарат состоит из парообразователя (круглодонная колба со стеклянной трубкой в пробке), отгонной колбы с двумя трубками в пробке (одна идет почти до дна от парообразователя, другая — короткая соединена с холодильником), водяного холодильника и приемной колбы. Навеску измельченного материала помещают в отгонную колбу, подкисляют виннокамен­ной или щавелевой кислотой и подключают кипящий парообразователь, после чего начинают подогревать отгонную колбу. Дистиллят собирают в приемную кол­бу. В первых его порциях можно определять синильную кислоту, в последующих — другие вещества.

Для количественного определения берут точную на­веску материала и отгонку продолжают до тех пор, пока перестанет проявляться специфическая качественная реакция на ядовитое вещество. Полученный дистиллят объединяют, замеряют его объем и количественно опре­деляют содержание вещества.

ТЕМА: ОБНАРУЖЕНИЕ ГОССИПОЛА В КОРМАХ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ

Цель занятия: освоить метод определения госсипола в кормах растительного происхождения.

Материальное обеспечение: проба кормов, 0,2 %-ного водного раствора едкого натра, ацетон, стеклянные бусинки, петролейный эфир, 2 %-ного водного раствора серной кислоты, хлороформ.