Отчет по практике: Ветеринарно-санитарная экспертиза мяса
Подготовка к исследованию.
Приготовление питательных сред, реактивов, красок.
Приготовление мясо-пептонного агара.
К 1000 мл мясо-пептонного бульона перед стерилизацией добавляют 20г агара и кипятят на слабом огне при постоянном помешивании до полного растворения.
Мясо-пептонный агар, охлажденный до температуры 50 -55°С, осветляют яичным белком (из расчета один белок на 1000 мл мясо-пептонного агара), помещают в автоклав, не завинчивают крышку автоклава, или в аппарат Коха на 1 ч, чтобы белок свернулся и, оседая, увлек за собой взвешенные частицы. Горячий мясо-пептонный агар фильтруют через ватно-марлевый фильтр, устанавливают в нем рН 7,0 - 7,4, разливают во флаконы или пробирки и 20 мин стерилизуют в автоклаве при температуре 120°С.
Приготовление среды Левина
К 100 мл расплавленного мясо-пептонного агара с рН 7,0 - 7,4 добавляют 2 мл 0,5%-ного водного раствора предварительно подогретой на водяной бане метиленовой сини, 1,5 мл 2%-ного раствора эозина (бактериологического), 2 г лактозы и 0,2 г двузамещенного фосфорного калия. Растворы красок готовят на дистиллированной воде и стерилизуют 1 ч при температуре 100°С. После добавления всех компонентов в указанном порядке среду тщательно перемешивают, разливают в чашки и подсушивают. Среда должна иметь красно-фиолетовый цвет.
Приготовление среды Китт - Тароцци
Свежую печень крупного рогатого скота разрезают на куски массой по 50 - 60 г, заливают равным количеством воды и кипятят в течение 30 мин при постоянном помешивании. Печеночный экстракт фильтруют через ватно-марлевый фильтр и смешивают с мясо-пептонным бульоном из расчета одна часть печеночного экстракта на три части бульона. Смесь нагревают до кипения, добавляют хлористый натрий из расчета 1,25 г на 1000 мл среды и устанавливают рН 7,6 - 7,8, после чего кипятят в течение 15 мин и фильтруют через бумажный фильтр.
В пробирки кладут мелко нарезанные кусочки печени по 1,5 - 2 г и заливают смесью печеночного экстракта с мясо-пептонным бульоном. На поверхность среды наслаивают 0,5 - 1 мл вазелинового масла. Среду стерилизуют в течение 30 мин при температуре 120°С.
Приготовление бульона Хоттингера и среды, его содержащей.
Для приготовления основного раствора Хоттингера в 1 дмЗ кипящей воды на 20 мин опускают 1 кг мяса, нарезанного маленькими кусочками, затем мясо вынимают, измельчают на мясорубке и снова кладут в тот же отвар. Добавляют 30-40 г измельченной поджелудочной железы (или 3-5 г панкреатина) и 20 смЗ хлороформа. Бутылки плотно закрывают пробкой и энергично встряхивают, ставят в термостат при температуре 37°С на 3-4 часа. Мясо в виде мелкозернистой массы осаждается на дно бутылки. Жидкость над мясом должна быть прозрачной. Жидкость сливают, фильтруют и стерилизуют при температуре (121±1)°С в течение 20 мин. Готовый раствор должен давать положительную реакцию на триптофан (розовое окрашивание при прибавлении 2 капель бромной воды в пробирку с пробой).
Для приготовления бульона Хоттингера смешивают 200 смЗ основного раствора Хоттингера, 400 смЗ мясного отвара и 400 смЗ, добавляют 5 г хлористого натрия, 0,2 г фосфорнокислого двузамещенного натрия, кипятят 10 мин и устанавливают рН (7,6±0,1). Бульон Хоттингера разливают высоким столбиком по пробиркам или флаконам, на дно которых кладут кусочки вареного мяса или фарша, наслаивают стерильное вазелиновое масло высотой около 2,0 см и стерилизуют при температуре (121±1)°С в течение 20 мин.
Для приготовления плотной среды Хоттингера с триптоном, глюкозой и дрожжевым экстрактом в 1 дмЗ бульона Хоттингера вносят 0,5 г дрожжевого экстракта или 2,5 смЗ раствора дрожжевого экстракта, 5 г глюкозы, 5 г триптона, 15-20 г агара, устанавливают рН среды (7,1+0,1) и стерилизуют ее при температуре (121±1)°С в течение 20 мин. Перед употреблением в расплавленную стерильную среду асептически вносят 0,6 г аскорбиновой кислоты.
Приготовление среды Крумведе-Олькеницкого в модификации Ко-валъчука
В 1 дм3 дистиллированной воды растворяют I г гипосульфита, 0,6 г соли Мора, 10 г мочевины, 15 г лактозы х.ч., 3,5 г сахарозы и 2 г глюкозы. Устанавливают рН среды до 7,4 - 7,6. Добавляют 46 г сухой среды с сахарозой и индикатором ВР. Все размешивают, кипятят в водяной бане в течение 40 мин. Разливают в пробирки по 5 - 6 см3 . Среду, разлитую в пробирки, стерилизуют 20 мин при давлении 5104 Па. После стерилизации среду скашивают так, чтобы в пробирке остался столбик высотой не менее 3 см.
Приготовление среды ХБ (хинозол-бромкрезол-пурпурной)
Для приготовления бромкрезол-пурпура 0,8 г порошка заливают 50 см3 этилового ректификованного спирта. Через день раствор готов к употреблению.
Для приготовления хинозола 0,1 г порошка растворяют в 100 см3 стерильной дистиллированной воды.
ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
Глубинный метод посева в плотные среды.
Жидкий продукт или разведение навески вносят параллельно в две чашки Петри и заливают не позднее чем через 15 мин расплавленной и охлажденной до температуры (45±1)°С питательной средой. Высота слоя питательной среды должна быть 4—5 мм.
Среду немедленно равномерно перемешивают с посевным материалом круговыми движениями чашки так, чтобы среда не вытекла из чашки н не загрязняла крышку. После застывания среды чашки с посевами вверх дном помещают в термостат.
Поверхностный метод посева на плотные среды.
Среду налипают в чашку Петри и после застывания подсушивают. При подсушивании для удаления влаги с поверхности среды чашки открывают, переворачивают вверх дном и выдерживают в течение 30 мин при 48—50°С или в ламинарном боксе 1—2 ч. или в других условиях, обеспечивающих испарение конденсационной влаги и исключающих микробное загрязнение.
На подсушенную среду наносят жидкий продукт или разведение навески и немедленно равномерно растирают по поверхности шпателем — изогнутой стеклянной палочкой.
Засеянную поверхность подсушивают, выдерживая чашки в горизонтальном положении в течение 15 мин.
Метод посева в жидкие среды.
В колбу или пробирки с питательной средой вносят навеску продукта или разведеные навески.