Реферат: Проект биолаборатории и технологическая карта производства пириформина

Для определения количества жизнеспособных спор в готовом препарате используется два метода: прямой подсчет в камере Горяева и метод высева на твердую питательную среду в чашках Петри.

Определение титра в камере Горяева.

От каждой партии препарата отбирают 3-5 проб из разных мест по всей глубине и составляют общую пробу массой 70-100 г. Общую пробу тщательно перемешивают, после чего отвешивают навеску 10г с точностью 0,01г и переносят в колбу со 100 мл стерильной воды и стерильным крупнозернистым песком. Колбу закрывают стерильной пробкой и взбалтывают ее содержимое в течение 5 минут. Разведение препарата в приготовленной взвеси составляет 1:10 Параллельно готовят 7-9 пробирок, в каждую из которых добавляют по 9 мл дистиллированной воды, закрывают ватными пробками и стерилизуют. Затем готовят серию последовательных разведений. Для этого из колбы чистой пипеткой берут 1 мл суспензии и переносят в первую пробирку с 9 мл воды, получают разведение 1:100. Суспензию этого разведения тщательно перемешивают с помощью новой (чистой) пипетки, затем берут 1 мл полученного разведения и переносят его во 2 пробирку (разведение в 1000 раз). Для каждого нового разведения необходимо использовать отдельную стерильную пипетку

Камеру Горяева с хорошо притертым стеклом заполняют суспензией соответствующего разведения. Количество спор подсчитывают в 5 больших квадратах камеры (или в 20-100 малых квадратах), определяют среднее количество клеток в 1 малом квадрате и рассчитывают по формуле

Х=N×4×10⁶ ,

Где Х – титр исследуемой суспензии клеток/1 мл

N – среднее количество клеток в одном малом квадрате

Для определения титра исходного препарата необходимо титр исследуемой суспензии умножить на соответствующее разведение.

Определение титра методом посева на питательную среду

Готовят серию последовательных разведений как указанно в предыдущем методе. Из трех последних разведений, предварительно тщательно перемешанных, производят посев в чашки Петри на агаризованную среду Чапека или сусло-агар из расчета 1 мл суспензии на чашку. Этот объем распределяют по поверхности среды шпателем. Из одного разведения делают не менее 5 параллельных высевов. Для параллельных высевов из одного разведения можно пользоваться одной стерильной пипеткой и одним шпателем. Засеянные чашки помещают в термостат с температурой 23-25⁰ С. Первый учет роста гриба проводят через 4-5 дней после посева, а затем через каждые 2-3 дня отмечают вновь появившиеся колонии антагониста. Титр препарата вычисляют по формуле:

Т=А+К

Где Т – титр препарата, спор/1г

А – среднее число колоний, выросших при высеве из данного разведения (среднее арифметическое из 5 чаш Петри)

К – разведение, из которого произведен высев.

При использовании чашечного метода все операции необходимо проводить в стерильном боксе [5].

2.7. Техника безопасности

При производстве пириформина следует соблюдать общие правила безопасности в микробиологических лабораториях

· При изготовлении суспензий необходимо пользоваться пипеткой с резиновой грушей

· При взятии навески или проб работу необходимо проводить в вытяжном шкафу

· Не допускать попадание живой культуры на кожу рук

· После окончания работы вымыть руки теплой водой с мылом

Кроме этого к работе допускаются лица прошедшие предварительный медицинский осмотр, инструктаж по технике безопасности и получившие письменное разрешение на право работы с биологическими агентами. Персонал должен быть обеспечен и систематически пользоваться спецодеждой:респиратором типа РУ-60 МА или ШБ-1 «лепесток», резиновыми перчатками, резиновым фартуком.

Во время обработок запрещено пить, курить, принимать пищу. [1,4,5]

2.8. Технико-экономический расчет

Таблица 1

Перечень оборудования и материалов для получения пириформина

Наименование	Количество, шт
Для производства пириформина
Пробирки	Не менее 50
Вата и марля (для приготовления пробок)	-
Спиртовка	1
Иглы микробиологические	-
Чашки Петри	Не менее 50
Колбы конические 0,5-1 л	Не менее 50
Термошкаф (для культивирования и сушки препарата)	2
Бактерицидные лампы (для стерилизации помещения)	2
Холодильник для хранения культур	1
Качалка возвратно-поступательного движения (для роста инокулята)	1
Фильтрующий материал (полотно или бумажные фильтры)	-
Мельница	1
Автоклав	1
Для культивации
Качалка кругового вращения	1
Колбы 1-3 л или стеклянные емкости	Исходя из разрешающей способности качалки

Нормы расхода ректификованного для стерилизации бокса и оборудования.

1. Обработка рук и инструментов – 10мл на 1 раз

2. Горение спиртовки 1ч – 130мл