Дипломная работа: Разработка условий оптимизации процесса амплификации ДНК

Возможно , что объединие этих методов за счет перевода полимеразной цепной реакции в формат микрочипов позволит создать диагностическую систему нового поколения, которую будут характеризовать следующие качества : более высокая чувствительность и, главным образом, специфичность определения нуклеиновых кислот, высокая производительность при низкой себестоимости выполнения анализа, общее сокращение количества манипуляций в пределах каждого этапа анализа.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Поставив перед собой цель объединить преимущества методов, мы столкнулись с рядом препятствий, касающихся инструментального обеспечения исследования. Проведение полимеразной цепной реакции в микрообъеме требует определенного технического оснащения. Современный рынок предлагает микропланшеты, объем лунок которых составляет не менее 200 мкл. Проведение ПЦР в микрообъеме в подобных планшетах противоречит условиям нашего эксперимента. Кроме того, современные амплификаторы не позволяют манипулировать формами термоблоков. В связи с этим перед началом исследований необходимо было создание экспериментальной аппаратной базы для амплификации и регистрации сигналов, изготовление микропланшетов с лунками, общий объем которых не должен превышать 2 мкл.

2.1. Изготовление микропланшетов

Для эксперимента были изготовлены пластины размером 50х50 мм с рабочей зоной 20х20 мм с различным количеством лунок (до 91 шт). При изготовлении планшетов мы руководствовались размером термокамер в экспериментальном образце амплификотора, поэтому такие их длина и ширина являются оптимальными. Схема амплификатора представлена на рис. 10.

Материал, из которого должны быть изготовлены плашки должен обладать следующими свойствами:

- термостойкость (материал должен выдерживать минимум 95 С-самая высокая температура в цикле);

- прочность(не должен подвергаться деформации даже при незначительных механических воздействиях);

- химическая инертность (материал не должен взаимодействовать с компонентами ПЦР смеси);

- дешевизна(материал должен быть не дорогим и доступным).