Учебное пособие: Программа учебной дисциплины "Биохимия"

4

16.

Определение глюкозо‑6‑фосфатазы – фермента-маркера микросомальной фракции.

4

4

17.

Выделение и очистка ферментов. Цитология ферментов.

4

4

Содержание дисциплины

1. Введение

Энзимология – наука о ферментах . Отрасли энзимологии: препаративная энзимология, инженерная энзимология. Методы энзимологии.

Способы количественного выражения ферментативной активности. Общая активность, удельная активность, молекулярная активность, активность каталитического центра.

2. Методы определения активности ферментов

Современные методы: химические, электрохимические, фотометрические, спектрофотометрические, флюориметрические.

3. Сравнительная биохимия ферментов

Органная специфичность распределения ферментов. Изучение органного распределения ферментов. Специфичность распределения ферментов в тканях: нервной ткани, мышцах, печени, соединительной ткани (крови), пищеварительной системе.

Цитология ферментов. Методика фракционирования ткани по субклеточным структурам. Изучение субклеточной локализации ферментов. Определение ферментов-маркеров лизосом, митохондрий, пероксисом, ядра, микросомальной фракции.

4. Методы выделения ферментов

Классические методы. Экстрагирование ферментов из биологического материала. Кислотная обработка, термическая обработка, фракционирование солями, органическими растворителями, ионообменная хроматография, гельфильтрация, электрофорез. Аффинная хроматография, носители и лиганды. Комбинирование различных методов для очистки ферментов. Критерии чистоты ферментных препаратов.

Иммобилизованные ферменты. Методы получения. Изучение свойств иммобилизованных ферментов.

5. Кинетические параметры и физико-химические свойства очищенных форм ферментов

Кинетика ферментативного катализа. Методика определения максимальной скорости ферментативной реакции. Определение константы Михаэлиса. Различные способы графического определения константы Михаэлиса и максимальной скорости реакции. Влияние концентрации фермента на скорость ферментативной реакции. Влияние концентрации субстрата. Влияние температуры и рН среды на скорость ферментативных реакций. Ингибиторы ферментов и их классификация. Конкурентное, неконкурентное, бесконкурентное, смешанное ингибирование. Способы определения типа и константы ингибирования.

Специфичность действия ферментов . Основные типы специфичности. Проявление специфичности на примере различных ферментов.

Список основной литературы

1. Кретович В.Л. Введение в энзимологию. – М.: Наука, 1986. – 332 с.