Курсовая работа: Специфичность фермента амилазы
а - в координатах v от [ S ] ; б - в координатах 1/v от 1 / [ S ] ; Vmax и Vi - максимальные скорости реакции; Кm и Kmi - константа Михаэлиса соответственно в отсутствие (1) и в присутствии (2) ингибитора.
Рис. 3. Графики зависимости скорости ферментативной реакции от концентрации субстрата в присутствии неконкурентного ингибитора.
При конкурентном типе ингибирования ингибитор увеличивает значение Кm , не оказывая влияния на максимальную скорость Vmax . Это означает, что при достаточно высокой концентрации субстрата [ S ] ингибитор вытесняется молекулами субстрата из комплекса EI. При неконкурентном ингибировании (рис. 4.22) ингибитор снижает величину максимальной скорости. Если при этом величина Кm не уменьшается, то говорят о полностью неконкурентном ингибировании. Подобный тип ингибирования имеет место при образовании неактивных, труднодиссоциирующих комплексов EI и (или) EIS. Часто, однако, наблюдается смешанный тип ингибирования, иногда называемый частично неконкурентным, или обратимым неконкурентным ингибированием (см. ранее), при котором снижение Vmax сочетается с одновременным увеличением значений Кm . Это означает, что комплекс EI сохраняет частичную активность, т.е. способность к образованию промежуточного тройного комплекса EIS, в котором субстрат подвергается замедленному каталитическому превращению. В редких случаях степень торможения активности фермента может увеличиваться с повышением концентрации субстрата. Для этого типа торможения был предложен, как отмечено ранее, довольно неточный термин «бесконкурентное ингибирование». Один из механизмов такого торможения обусловлен возможностью соединения ингибитора с комплексом ES с образованием неактивного или медленно реагирующего тройного комплекса EIS.
2. ЭКСПЕРЕМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
???????????? ??????????? ??????? ???????? ?? ??????? ?????1. ????????????? ??????? ????????????? ????????????? ???????????? ?????:???????????? ??? ??? ???? ???????????????? ????? ??? ???????? ???????? ????. ????? ? ??? 20 ??. ???????????????? ????, ??????? ?? ?? ??? ????? ???? ?????. ?????????? ???????? ????? ? ?????? ??? ?????. ???????? ???????????? ????? ??????? ?????, ?????????? ???????-???????.??? ??????:? 2 ???????? ???????? ?? 20 ?????? ???????? ????????, ? 3-?- 20 ?????? ???????? ????????.? ?????? ???????? ?????? 10 ?????? ???????????????? ????, ?? ?????? ? ? ?????? ???????? ???????? ?? 10 ?????? ??????????? ?????. ?????????? ???????? ?????????? ????????????? ? ????????? ???????? ? ??????? ???? ? ???????????? 37-40? ?. ????? ???? ????? ????? ????????? ??????? ? ????????? ??????? ? ????? (??? ???? ???????? ? ?????? ???????? ?? 1 ????? ???????? ???? ? ???????? ?????) ? ? ?????????? ????????? (???????? ?? 5 ?????? ?????????? ????????).?????????? ???????? ? ??????? 1 ??????? 1| № пробирки | Субстрат | фермент | Реакция с йодом | Реакция с Фелинговой жидкостью | |
| До | После | ||||
| 1 | крахмал | бесцветный. | Сине-фиолетовое окрашивание (со временем исчезает) | - | |
| 2 | крахмал | амилаза | Бесцветный | - | |
| 3 | сахароза | амилаза | бесцветный | Голубой оттенок (со временем не исчезает) | - |
??????? ????????? ???????? ?? ????????? ? ???????? ???????? ??????? ??????, ? ??? ??????????????? ????????????? ????? ? ?????????? ?????????, ? ????????????? ? ????????? ??????. ??????? ???????????? ???????? ????????, ???????? ?? ???????????? ???????? ????????. ??????? ????????? ???????? ? ???????? ???????
Обнаружение продуктов гидролиза крахмала
Реакция с жидкостью Фелинга:
Реакция с реактивом Люголя:
2.Влияние ингибиторов и активаторов на активность амилазы.
Ход работы:
В 3 пробирки налить по 5-10 капель разведенной слюны. В первую пробирку добавляют 1 каплю хлористого натрия (NaCl), во вторую -1каплю раствора сернокислой меди (CuSO4) , в третью – 1 капли воды. Затем в каждую пробирку прилить по 5 капель раствора крахмала. Все три пробирки на 2-3 минуты поместить в водяную баню при температуре 37-40 С. Добавит в каждую пробирку по 1 капле раствора йода в йодистом калии.
?????????? ???????? ? ??????? 2 ??????? 2| № пробирки | Фермент | Эффектор | Субстрат | Реакция с йодом | наблюдения |
| 1 | Амилаза | NaCl | Крахмал | Синие окрашивание | Прозрачн. |
| 2 | Амилаза | CuSO4 | Крахмал | Синие окрашивание | Синие окрашивание |
| 3 | Амилаза | Н2 О | Крахмал | Синие окрашивание | Бледно-голубое окрашивание |
3. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
????????? ????? ??????? ????????????? ???????? ???????????? ??????? ?????????? ? ????????? ????????? ????? ?????????? ???????. ? ????????? ????? ???????? ? ??????? ????? ????????? ????????, ??? ????? ?????? ????? ????????? ?? 1000 ????????? ?????????, ?????? ?? ??????? ???????? ?? ??? ???? ?????????? ???????.Важно подчеркнуть, что изучение ферментов имеет огромное значение для любой фундаментальной и прикладной области биологии, а также для многих практических отраслей химической, пищевой и фармацевтической индустрии, занятых приготовлением катализаторов, антибиотиков, витаминов и многих других биологически активных веществ, используемых в народном хозяйстве и медицине
Роль ферментов в жизнедеятельности животных, растений и микроорганизмов колоссальна. Благодаря каталитической функции разнообразные ферменты обеспечивают быстрое протекание в организме и вне его огромного числа химических реакций.
В природе под каталитическим воздействием ферментов осуществляются процессы гидролиза, фосфоролиза, переноса различных групп (метильные радикалы, остатки фосфорной кислоты и т. д.), окисления и восстановления, расщепления и синтеза, изомеризации и т. п. В частности они катализируют реакции синтеза и распада нуклеиновых кислот, участвуют в процессе пищеварения, катализируют реакции анаэробного окисления и процесс свертывания крови. Практически все химические преобразования в живом веществе протекают с помощью ферментов. Естественно поэтому, что каталитическая функция ферментов лежит в основе жизнедеятельности любого организма
Разобрав поставленную задачу, изучение специфичности амилазы можно выделить следующее выводы:
1. Фермент амилазы слюны, осуществляет гидролиз крахмала до мальтозы. Амилаза действует на -1,4 -гликозидные связи, расщепляют амилозу внутри её цепи, в результате чего с большой скоростью образуются низкомолекулярные продукты гидролиза - нормальные -декстрины. Их дальнейший гидролиз даёт мальтозу, мальтотрио?