Учебное пособие: Проведение гематологического обследования рыб

- микроскоп,

- окрашенные мазки крови (см. п. 3),

- иммерсионное масло.

12.1.2. Ход определения и учет результатов. Определяют число лейкоцитов, встречающихся при подсчете 1000 эритроцитов в мазке крови, и затем пересчитывают их количество на 1 мкл по формуле:

Х = (А х В)/1000,

где: Х - общее количество лейкоцитов в 1 мкл крови;
А - число эритроцитов в 1 мкл крови, определенное в камере Го-ряева:
В - число лейкоцитов, определенное при подсчете 1000 эритроцитов на мачке крови.

12.2. Прямой метод подсчета количества лейкоцитов 12.2.1

12.2.1. Подготовка к исследованию.

Приготовления растворов А и В

- 25 мг нейтральрота и 0,6 г натрия хлористого растворяют в 100 мл дистиллированной воды ( раствор А можно использовать одни сутки);

- 12 мг кристаллвиолета, 3,8 мг натрия цитрата и 0,4 мл формалина растворяют в 100 мл дистиллированной воды (раствор В использовать около недели).

12.2.2. Оборудование и реактивы:

- микроскоп,

- счетная камера форменных элементов крови,

- смеситель для подсчета эритроцитов млекопитающих,

- пастеровские пипетки - стерильные,

- часовое стекло,

-2 -% раствор натрия цитрата,

- растворы А и В.

12.2.3. Ход определения и учет результатов.

Взятие крови производят в соответствии с п.2 настоящих Методических указаний. Кровь из часового стекла набирают в смеситель для подсчета эритроцитов млекопитающих до метки 0,5 или 1. Кончик смесителя вытирают ватой, набирают в смеситель раствор А до половины расширения смесителя, затем до метки 101 заполняют раствором Б.

Если кровь набирают до метки 0,5, то получается разбавление в 200 раз, если до метки 1 - в 100 раз.

После наполнения со смесителя снимают резиновую трубку, зажимают его между большим и средним пальцем и перемешивают кровь с разбавляющей жидкостью. Смеситель оставляют в горизонтальном положении на 5-10 минут, затем вновь перемешивают. Первые 2-3 капли, выходящие из смесителя, стряхивают и только следующей каплей заряжают счетную камеру. Покровное стекло должно быть заранее притерто к счетной камере до появления колец Ньютона. Под действием растворов А и В происходит витальная окраска форменных элементов крови. Ядра лейкоцитов окрашиваются в темный фиолетово-красный цвет, а протоплазма - в розовый. В эритроцитах слабо окрашиваются только ядра. Благодаря этому эритроциты и лейкоциты различимы в камере.

Количество лейкоцитов подсчитывают в 80 больших квадратах и определяют их количество по формуле:

x=mx250xУ/п, гдe:

Х - число лейкоцитов в 1 мкл,

М- общее количество клеток в подсчитанных квадратах,

У - степень разбавления крови,

п - число просмотренных квадратов.