Учебное пособие: Проведение гематологического обследования рыб
В первой пробирке (пробирка № 1) определяют величину светопо-глощения раствора крови, с исходной концентрацией оксигемоглобина (гемоглобина), во второй пробирке (пробирка № 2) - величину светопо-глощения раствора крови, в которой весь оксигемоглобин (Нв02) превращен в метгемоглобин (mthb).
Содержание оксигемоглобина в исходной пробе крови соответствует содержанию гемоглобина в ней.
Поскольку в параллельной пробе крови (пробирка № 2) весь гемоглобин полностью переводится в метгемоглобин добавлением насыщенного раствора феррицианида калия, величина светопоглощеиил раствора метгемоглобина практически постоянная и зависит от исходного уровня гемоглобина, то есть оксигемоглобина.
Определение светопоглощенил растворов крови в обеих пробирках проводят на фотоэлекгроколориметре (ФЭКе) при красном светофильтре.
У ФЭКов различных марок длина волны, соответствующая максимуму пропускания при красном светофильтре, бывает различной. Так, у ФЭКа - 56 при работе с красным светофильтром № 8 длина волны составляет 597 нм, у спектрофотометров ФЭК-56 ПМ и ФЭК КФК-2 длины волн при работе с красным светофильтром лежат в интервале 600 -670 нм,
Определение светопоглощения растворов крови проводят с использованием ФЭКов различных марок при красном светофильтре в вышеприведенном интервале длины волн, используя для сравнения 0,25 %-ный раствор аммиака в кюветах с рабочей длиной 10 мм.
Различия, связанные с измерением экстинций растворов крови при различающихся длинах волн при работе на ФЭКах различных марок, корригируют путем введения в расчетную формулу коэффициента - величины приведенной экстинции раствора крови с исходным уровнем ок-сигемоглобина (ЕнвО2), как показано в разделе - расчет результатов анализа. При расчете этой приведенной величины используют измеренные опытным путем величины светопоглощения раствора крови с исходным уровнем оксигемоглобина (ЕнвО2)
- пробирка № 1; метгемоглобина (emthb) - пробирка № 2.
Предварительно опытным путем на молоди карповых рыб установлена средняя величина светопоглощения раствора крови с исходным уровнем оксигемоглобина (ЕнвО2) и средняя величина светопоглощения раствора крови с полученным уровнем метгемогдобина (ЕМthв).
Таким образом, найдено, что среднее значение плотности раствора крови с исходным уровнем оксигемоглобина (ЕнвО2) составляет 0,15, а метгемоглобина (emthb) - 0,77.
Поскольку гемоглобин в пробе крови рыб полностью переводится в метгемоглобин добавлением насыщенного раствора феррицианида калия, изменение светопоглощения, равное 0,62 (0,77-0,15) соответствует 100 % содержания метгемоглобина.
Все эти данные были необходимы для выведения коэффициентов при расчете содержания метгемоглобина в крови рыб по данной методике.
По методике проводят определение светопоглощения растворов исследуемой крови рыб с исходным уровнем оксигемоглобина (пробирка № 1) и полученным уровнем метгемоглобина (пробирка № 2) и рассчитывают содержание метгемоглобина в крови по нижеприведенной формуле, используя установленный коэффициент и расчетное приведенное значение светопоглощения раствора оксигемоглобина с учетом коррекции измерения этой величины при красном светофильтре с различающимися длинами волн,
Х=(e2-e1) x 1,61 x 100, где:
Х - содержание метгемоглобина в исследуемой пробе крови, %; е2 - приведенное значение светопоглощения"раствора оксигемоглобина (ЕhвО2), расчет его приводится ниже е1 - среднее значение величины светопоглощения раствора оксигемоглобина, равное 0,15; 1,61 - расчетный коэффициенг, найденный из средних величин светопоглощения растворов оксигемоглобина и метгемоглобина, расчет его также приводится далее. Значение Е; - приведенное значение светопоглощения раствора оксигемоглобина
(ehbo2) находят из пропорции с использованием измеренных величин светопоглощения раствора оксигемоглобина (пробирка №1) и метге-моглобина (пробирка № 2) в опыте. e2 e4 e3xe4 -— = — откуда Е2=———— , где:
e3 e5 e5
Е2 - искомая величина - приведенное значение оптической плотности раствора оксигемоглобина - (ЕНвО2); Е3 - среднее (для рыб) значение оптической плотности раствора мет-гемоглобина, равное 0,77; Е4 - измеренное значение оптической плотности раствора оксигемоглобина (пробирка № 1); e5 - измеренное значение оптической плотности раствора метгемоглобина (пробирка № 2).Полученное значение Е2 подставляют в формулу для расчета содержания метгемоглобина в крови рыб.
Если приведенное значение оптической плотности раствора оксигемоглобина (Е2) будет равно или меньше средней величины оптической плотности раствора оксигемоглобина (е1 = 0,15) (что объясняется индивидуальными колебаниями содержания гемоглобина в крови рыб), то содержание метгемоглобина будет равно или меньше 1,61 %.
Гематологические показатели рыб (физиологическая норма)
| Вид работы | Карп | ||||
| Возраст | Сеголеток (пруды, экстенсивная технология) | Сеголеток (пруды, экстенсивная технология) | Сеголеток (садки) | Сеголеток (бассейн) | |
| Гемоглобин, Г/л | 3 | 85,1± 2,3 | 78,1±4,5 | 89,0 ± 2,4 | 75,4 ± 4,3 |
|
Гематокрит, л/лх10'2 | 4 | 39,9 ± 1,1 | 36,2 ± 0,2 | 35,4 ± 0,3 | 34,1 ± 1,0 |
| Эритроциты, млн/мкл | 5 | 1,5 ± 0,004 | 1,35 ± 0,4 | 1^09 ±0,4 | 1,3± 0,2 |
| Ср, объем Эритро-цитов, мкм3 | 6 | 268,7 ± 10,6 | 342,5± 2,8 | 24,7 ±2,7 | 349,6 ± 7,3 |
| Содержание гемоглобина r эритроцитах . пг | 7 | 56,7 ± 2,7 | 46,3 ± 1,9 | 81,6 ± 2,3 | 58,0± 4,0 |
|
Лейкоциты, тыс./мкл | 8 | 24,5 ± 4,3 | 37,5 ± 5,2 | 41,0 ± 4,5 | 39,4± 4,3 |
| Тромбоциты, тыс./мкл | 9 | НД' | 28,02 ± 3,0 | НД | НД |
| Бласты, % | 10 | 0,6 ± 0,4 | 0" | 0,3 ± 0,1 | 1,1 ±0,2 |
| Про миелоциты, % | 11 | 0,1 ± 0,1 | 0 | 0,1 ± 0,01 | 0,6 ± 0,2 |
| Миелоциты нейт-рофильные,% | 12 | 0,5 ± 0,2 | 3,2 ± 1,1 | 0,5± 0,1 | 0,3 ± 0,1 |
| Метами елоцитьт нсйтр., % | 13 | 0,4 ± 0,2 | 3,1 ± 1,0 | 0,7 ± 0,2 | 0,7 ± 0,2 |
| 11алочкоядерные нейтрофилы, % | 14 | 0,4 ± 0,2 | 5,2± 1,4 | 1,0±0,3 | 0,8 ± 0,2 |
| Сегментоядерные Нейтрофилы, % | 15 | 0,3 ± 0,1 | 4,0± 0,7 | 1,0 ± 0,5 | 1,0± О.З |
| Общее число нейт-рофилов, % | 16 | 1,6 ± 0,2 | 15,5 ± 1,6 | 3,2 ± 1,0 | 2,8 ± 0,7 |
| Эозинофилы и псевдоэодинофилы” % | 17 | 3,7± 1,2 | 4,0 ± 0,09 | 0 | 0 |
| Базофилы и псев-добазофшш, % | 18 | 3,6 ± 0,8 | 3,5± 1,4 | 0 | 1,0±0.5 |
| 11енистые клетки, % | 19 | 0,7 ± 0,3 | 4,0 ± 0,7 | 1,9± 0,4 | 1,6±0,4 |
| Моноциты, % | 20 | 4,2 ± 0,5 | 8,8 ± 1,5 | 3,0 ± 0,5 | 2,7 ± 0,7 |
| Лимфоциты, % | 21 | 85,6 ± 1,6 | 64,2 ± 4,9 | 91,5± 0,9 | 90,2 ± 1,4 |
| Содержание общего белка в сыворотке крови,г % | 22 | 2,5-3,0 | 2,5-3,0 | НД | нд |
| 1 | Пестрый толстолобик | Белый толстолобик | ||||
| 2 | Сеголеток (установка с замкнутым водообменом) | Сеголетки (лето) | Сеголетки (зима) | Годовики | Двухлетки | Сеголетки (лето) |
| 3 | 59,5 ± 3,4 | 74,9± 2,2 | 96,9 ± 2,8 | 65,8 ± 3,8 | 85,8± 2,4 | 80,9± 1,4 |
| 4 | 30,6± 1,6 | 37,8 ± 0,7 | 40,7 ± 2,9 | 28,6 ± 1,3 | 40,2 ± 1,7 | 51,4± 1,3 |
| 5 | 1,0± 0,04 | 1,9±0,05 | 1,8± 0,07 | 1,5± 0,2 | 1,7 ± 0,08 | 1,9 ± 0,04 |
| 6 | 303,3 ± 0,9 | 204,4 ± 12,9 | 247,08 ± 28,5 | 195,6 ± 8,4 | 243,1 ± 14,3 | 266,4 ± 6,2 |
| 7 | 59,6± 1,6 | 40,67 ± 3,4 | 55,2± 3,9 | 44,98 ± 1,5 | 51,38± 3,2 | 41,6± 0,9 |
| 8 | 52,7± 0,2 | 26,2 ± 4,6 | 10,6 ± 1,8 | 34,6 ± 2,7 | 39,8 ± 3,7 | 56,8 ± 4,0 |
| 9 | НД | 29,95 ± 3,6 | 11,5 ± 1,95 | 21,l± 2,5 | 34,3 ± 1,4 | 63,6± 8,1 |
| 10 | 1,2 ± 0,3 | 0 | 0,1 | 0 | 0 | 1,2± 0,3 |
| 11 | 0,9± 0,3 | 0,6 ± 0,1 | 0,7 ± 0,2 | 0,1 | 0 | 1,1± 0,2 |
| 12 | 0,64 ± 0,1 | 0,4 ± 0,1 | 2,5 ± 0,2 | 1,3±0,3 | 0 | 0,9 ± 0,2 |
| 13 | 0,31 ±0,1 | 1,3± 0,3 | 22,9 ± 2,7 | 18,4 ± 2,6 | 2,9 ± 0,4 | 0,7 ± 0,2 |
| 14 | 0,72 ± 0,2 | 0,2± 0,1 | 7,7 ± 1,0 | 8,8 ± 1,1 | 0,5 ± 0,1 | 0,8± 0,3 |
| 15 | 0,39± 0,1 | 0 | 2,7 ± 0,6 | 2,1 ±0,5 | 0 | 0 |
| 16 | 2,0 ± 0,3 | 2,5± 0,3 | 35,8 ± 2,7 | 30,6 ± 2,6 | 3,5 ± 0,4 | 2,4 ± 0,3 |
| 17 | 0 | 9,7 ± 1,1 | 1,5 ± 0,3 | 0,1 ±0,3 | 6,9 ± 0,6 | 4,2 ± 0,6 |
| 18 | 1,6± 0,4 | 0,4± 0,1 | 0 | 0 | 0 | 0,1 |
| 19 | 1,2±0,3 | 0 | 0 | 0,1 | 0,5 ± 0,1 | 0,2 |
| 20 | 2,5 ± 0,4 | 0,2± 0,1 | 1,3±0,2 | 0,4 ± 0,1 | 0 | 0,9 ± 0,2 |
| 21 | 90,6± 0,9 | Я7,1± 1,4 | 60,6 ± 3,3 | 68,5± 4,1 | 88,9± 0,7 | 90,1±0,8 |
| 22 | Нд | НД | 1,7-3,0 | НД | 4,41 0,2 | НД |
| 1 | Белый толстолобик | Большеротый буфалло | |||||
| 2 | Сеголетки (зима) | Годовики | Двухлетки | Сеголетки (лето) | Сеголетки (зима) | Годовики | Двухлетки |
| 3 | 105,9 ± 2,3 | 82,1 ±8,0 | 93,3± 3,1 | 77,0 ± 2,2 | 81,5 ±3,1 | 90,4 ± 3,3 | 86,5 ± 2,0 |
| 4 | 56.2 ± 1,46 | 47,2 ± 1,8 | 45,13± 0,7 | 32,36± 2,0 | 40,4 ± 1,7 | 36,2 ± 1,6 | 41,6 ± 0,95 |
| 5 | 2,6 ± 0,07 | 2,37 ± 0,1 | 2,09± 0,1 | 1,15±0,05 | 1,09 ± 0,03 | 1,2±0,08 | 1,23 ± 0,07 |
| 6 | 216,1 ± 5,4 | 199,2 ± 8,1 | 219,0± 12,1 | 280,6 ± 13,1 | 75,79 ± 19, | 304,9 ± 16,1 | 338,6 ± 18,8 |
| 7 | 40,8± 1,1 | 34,8± 1,6 | 44,63 ± 1,3 | 66,95 ± 1,8 | 75,6 ± 3,1 | 80,9± 3,9 | 70,3 ± 3,5 |
| 8 | 14,8 ± 1,8 | 52,9 ± 6,9 | 48,1 ±2,9 | 6,8 ± 1,4 | 6,3± 0,9 | 25,9 ± 1,9 | 19,97 ± 1,8 |
| 9 | 24,27± 4.3 | 54,09 ± 6,0 | 55,9± 3,5 | 3,9 ± 0,8 | 7.3 ± 1,7 | 5,95 ± 1,2 | 17,64± 1,7 |
| 10 | 0 | 0 | 0,1 | 1,5 ± 0,6 | 0,1 | 0 | 0 |
| 11 | 0,2 | 0,2 | 0,2 ± 0,1 | 3,0± 1,4 | 0,7 ± 0,2 | 0,2 ± 0,1 | 0,5± 0,2 |
| 12 | 1,5 ± 0,2 | 0,9± 0,1 | 0,6 ± 0,1 | 1,1± 0,4 | 1,3 ± 0,3 | 0,2 ± 0,1 | 0,5 ± 0,2 |
| 13 | 5,9 ± 1,0 | 12,2 ± 1,4 | 3,2± 0,4 | 1,6± 1,1 | 1.4±0,3 | 0,9 ± 0,2 | 1,6± 0,3 |
| 14 | 2,6 ± 0.7 | 3,4 ± 0,6 | 0,9 ± 0,4 | 1,1 ±0,8 | 0,7 ± 0,4 | 2,1 ±0,4 | 2,8± 0,4 |
| 15 | 0,5 ± 0,1 | 0,2± 0,01 | 0,2 ± 0,01 | 0,1 ± 0,1 | 2,0 ± 0.4 | 1,6 ± 0,4 | 0,7 ± 0,1 |
| 16 | 10,5 ± 1,0 | 16,7± 1,4 | 4,9 ± 0,4 | 3,9 ± 1,1 | 5,4± 0,4 | 4,8 ± 0,4 | 5,6 ± 0,4 |
| 17 | 0,3± 0,1 | 0,1 | 3,1 ±0,5 | 6,6 ± 1,7 | 1,8± 0,4 | 1,3± 0,2 | 2,1± 0,3 |
| 18 | 0 | 0 | 0,1 | 0 | 0,1 | 0 | 0 |
| 19 | О | 0,1 | 0,2 ± 0,1 | 6,3 ± 1,6 | 1,2± 0,3 | 2,0 ± 0,3 | 3,6 ± 0.7 |
| 20 | 0,3± 0,1 | 0,1 | 0,3 ± 0,1 | 3,1 ±0,6 | 3,3 ± 0,2 | 0,5 ± 0,1 | 0,2 |
| 21 | 88,7 ± 2,0 | 82,9± 2,1 | 91,0± 0,8 | 75,5 ± 3,5 | 87,6 ± 1,5 | 91,2± 1,1 | 87,9 ± 1,1
К-во Просмотров: 458
Бесплатно скачать Учебное пособие: Проведение гематологического обследования рыб
|