Учебное пособие: Проведение гематологического обследования рыб

Для характеристики лейкоцитозов и лейкопений, возникающих у рыб при различных заболеваниях, используют дифференциальный подсчет лейкоцитов, то есть выводят лейкоцитарную формулу. Количество различных групп лейкоцитов выражают в процентах (%).

Лейкоцитарный состав представлен у рыб эозинофилами, нейтрофи-лами, базофилами, относящимися к гранулоцитам; лимфоцитами и моноцитами, относящимися к агранулоцитам, а также бластами.

13.1. Оборудование:

- микроскоп,

- окрашенные мазки крови (см. п. 3.),

- иммерсионное масло.

13.2. Ход определения и учет результатов.

Для определения лейкоцитарной формулы производят подсчет 200 клеток белой крови в мазке под увеличением микроскопа об.90 х ок.7 (с иммерсией). Подсчет лейкоцитов лучше проводить в центральных и несколько удаленных от бокового края участках начальной трети части мазка. Все встречающиеся клетки белой крови записывают в специальную таблицу в соответствии с классификацией клеточных форм (Иванова, 1983) и рассчитывают процентное соотношение клеток белой крови, то есть групп лейкоцитов в процентах. Для этого используют формулу:

Х = (А х 100) / 200, где:

Х - процент определяемой группы клеток в лейкоцитарной формуле; А - количество этих клеток, найденное при подсчете 200 лейкоцитов (по показанию счетчика).

Лейкоцитарная формула указывает только на относительное соотношение лейкоцитов. Для определения их абсолютного значения используют формулу пересчета, т.е. выясняют количество каждого вида клеток в 1 мкл крови (шт./мкл).

Формула пересчета:

Х = (А х В) /100, где:

А - процент определяемой группы лейкоцитов в лейкоцитарной формуле, %;
В - общее число лейкоцитов в 1 мкл, тыс. шт./мкл;
100 - общий процент всех лейкоцитов в лейкоцитарной формуле. %.

14. Определение метгемоглобина

При накоплении метгемоглобина в крови выше определенного уровня возникает патологическое состояние, называемое метгемоглобинемией. Вследствие метгемоглобинемии снижается кислородная емкость крови и развивается гипоксия, что сопровождается торможением обменных процессов и накоплением недоокисленных продуктов в тканях.

Метод основан на сравнительном измерении оптической плотности растворов исследуемой крови с исходной концентрацией оксигемоглоби-на (гемоглобина) и параллельной пробы крови, в которой весь оксиге-моглобин окислен до метгемоглобина феррицианидом калия , с использованием фотоэлектроколориметра при красном светофильтре.

14.1. Подготовка к исследованию 0,25% - ный раствор аммиака готовят, добавляя к 1 мл аммиака 99 мл дистиллированной воды.

Насыщенный раствор фсррицианида калия готовят, растворяя 70 г этой соли в 100 мл дистиллированной воды, раствор хранят не более недели. Раствор гепарина готовят путем прибавления к 5 мл гепарина 20 мл дистиллированной воды.

14.2. Оборудование и реактивы

Аммиак водный (nh4ОН),ГОСТ 3760-64.

Калий железосинеродистый (феррицианнд калия, соль кровяная красная) ГОСТ 4206-65. Гепарин (25000 ед.).

Химические пробирки.

Пипетки на 1, 10 мл.

Фотоэлектроколориметр (ФЭК) с красным светофильтром.

14.3. Ход определения и учет результатов

Для а налита у исследуемых рыб отбирают в пробирку 1 мл крови из сердца или хвостовой артерии. Кровь стабилизируют, добавляя в пробирку 2-3 капли раствора гепарина. У молоди рыб возможно групповое взятие крови (от 2 рыб и более).

При необходимости перевозки или хранения проб крови, закрытые пробками пробирки с кровью помещают в термос со льдом или в морозильную камеру холодильника с температурой - 12° С, кровь можно хранить в течение нескольких суток.

Перед исследованием кровь размораживают и тщательно перемешивают.